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目的:抑郁症是最流行最常见的精神疾病,一部分的患者对经典的抗抑郁药具有耐药性。最近研究发现,细胞核的WNT信号通路在抑郁症的发病机制中起着关键作用。本研究中,我们聚焦在WNT信号通路的关键分子β-catenin及其下游转录因子TCF4,研究增加慢性应激模型的应激小鼠内的信号通路表达的差异。在生命早期,母婴之间的联系对个体的神经发育至关重要,甚至影响成年期面对环境应激的反应性。本实验研究母婴分离与成年期慢性温和性应激这两种动物模型的组合效应,通过对比单次应激与两次应激模型的抑郁、焦虑样行为结果和生化学指标的差异,对母婴分离的影响进行探讨;ES和WNT激动剂可以深化研究WNT信号通路的临床意义并为抑郁症的治疗提供新的靶点。研究方法:选取10只成年雄鼠和20只成年雌鼠作为繁育者,随后选择70只子代雄鼠建立母婴分离模型(MS)和成年期慢性温和性应激模型(CMS)。将70只刚出生的小鼠随机分为母婴分离组和对照组;MS操作流程为:仔鼠PND2-PND9每天分离3小时,PND10-PND16每天分离4小时,PND17-PND21每天分离5小时;从上午9点开始分离,仔鼠也互相隔离,对照组仔鼠正常饲养。所有子代小鼠均在成年期(PND60-PND96)接收持续时间为3周的慢性温和性应激。该模型包括:食物剥夺(12h)、水剥夺(12h)、空笼(12h)、湿笼(12h)、斜笼(12h)、频闪(12h)、昼夜颠倒(24h)。每种应激模型随机分为三组进行药物干预,持续21天,ES:10mg/kg/d,WNT agonist:5 mg/kg/d,等体积的生理盐水:10mg/kg/d,进行腹腔注射。此时,根据应激和药物作用的不同,小鼠被随机分成了7组。待小鼠应激结束后,进行糖水偏好实验、旷场试验、高架十字实验、强迫游泳实验来评价抑郁焦虑样行为;并使用免疫印迹实验检测小鼠海马体(HIP)中β-catenin及其下游转录因子TCF4的表达水平。结果:1、糖水偏好实验和强迫游泳实验多用来检测抑郁样行为。统计分析显示,与空白组对比,应激减少了小鼠的糖摄取指数,增加了游泳的不动时间,说明经历过童年期MS的小鼠在面对成年期应激后抑郁水平增加。而ES和WNT agonist的药物干预使应激小鼠的糖摄取指数增加,不动时间减少,药物干预均缓解了小鼠的抑郁水平。暴露过MS的小鼠,WNT agonist干预后的糖水偏好指数比对照组的低,ES干预后的不动时间比对照组的低,推断MS降低了ES和WNT激动剂的治疗效果。2、统计分析小鼠进入旷场试验中心区域的时间和次数,无法事后检验。3、统计分析小鼠进入高架十字实验的开放臂的时间和次数,结果显示,经历过MS的小鼠在成年期应激后表现出开放臂的进入次数和探索时间减少,推测MS使暴露于成年慢性应激的小鼠的焦虑水平增加。ES和WNT agonist干预后,应激小鼠表现出时间和次数的增加,即药物干预缓解了小鼠的焦虑水平。4、对WB实验结果统计分析发现,与空白对照组相比,经历过MS的小鼠面对成年应激后β-catenin和TCF4水平降低,推测生命早期的MS阻碍WNT通路的表达。ES和WNT agonist的药物干预逆转了海马体内的β-catenin和TCF4的低水平表达,即药物干预提高了WNT通路的活性。同时,MS降低了干预后的海马体内TCF4的升高幅度,表明MS会影响WNT激动剂的治疗效果。结论:母婴分离(MS)可影响成年期子代小鼠面对应激的敏感性,增加小鼠暴露在慢性温和性应激后的抑郁和焦虑样行为;海马体内β-catenin和TCF4的表达水平也表现出相应的下降。ES和WNT agonist在激活受阻碍的WNT通路的同时,对应激后的抑郁和焦虑样行为起着缓解作用。调节WNT通路可能是减轻应激后行为结果的关键,可将WNT通路作为抗抑郁治疗的新靶点和新思路。