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目的:
应用诱导培养技术从人胶质瘤细胞系U87中诱导培养胶质瘤干细胞,分析其生物学活性。研究在胶质瘤干细胞中鞘氨醇激酶与烷化剂敏感性关系。应用鞘氨醇抑制剂诱导肿瘤干细胞分化增加烷化剂抗肿瘤效果,确定鞘氨醇激酶为胶质瘤治疗的有效靶点。
方法:
通过诱导培养技术从人胶质瘤细胞系U87当中诱导培养胶质瘤干细胞。利用免疫荧光技术检测胶质瘤干细胞球CD133和巢蛋白(Nestin)。应用MTT试验检测胶质瘤干细胞和普通胶质瘤细胞对烷化剂药物尼莫司丁(ACNU)的敏感性。应用定量PCR技术比较胶质瘤干细胞和普通胶质瘤细胞的鞘氨醇激酶1基因(SPHK1)表达差异。应用MTT试验和流式细胞仪检测在胶质瘤干细胞和普通胶质瘤细胞中应用鞘氨醇激酶抑制剂(SKI)增加肿瘤细胞对烷化剂药物尼莫司丁(ACNU)敏感性。
结果:
试验表明应用诱导培养技术可以培养出典型的胶质瘤干细胞球。通过MTT试验检测其对抗化疗药物的能力明显高于普通胶质瘤细胞。利用免疫荧光技术检测到在胶质瘤干细胞出现CD133和Nestin荧光标记。通过定量PCR胶质瘤干细胞中鞘氨醇激酶1(SPHK1)基因表达明显高于普通胶质瘤细胞。通过MTT试验和流式细胞仪检测,鞘氨醇激酶抑制剂(SKI)能够明显增加肿瘤细胞对烷化剂药物(ACNU)敏感性。
结论
U87细胞中存在少量增殖、多向分化、抗烷化剂能力更强的胶质瘤干细胞。鞘氨醇激酶是一个治疗肿瘤的有效靶点,通过应用鞘氨醇激酶抑制剂可以诱导胶质瘤干细胞分化增加对烷化剂药物尼莫司丁(ACNU)的敏感性促使细胞凋亡。