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甲型流感病毒(Influenza A Virus,IAV)是一种严重危害到人类和易感动物健康和安全的正粘科病毒。天然免疫系统是机体防御病原微生物入侵的第一道防线,其生物效应依赖于复杂的信号传导和动态的基因表达调控。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一类不编码蛋白质的RNA转录本。病毒可以利用宿主的lncRNA来调控细胞基因的表达模式,进而改变细胞内的微环境,为自身的复制和增殖创造有利条件。研究团队前期lncRNA组学数据提示IAV感染可以诱导宿主lncRNA TSPOAP1-AS1的表达。为了探究TSPOAP1-AS1对于IAV感染的影响及其机制,我们进行了以下研究工作。首先,检测了不同IAV毒株以及不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)感染A549细胞后不同时间点TSPOAP1-AS1、Ifnb1和IAV M基因的表达,结果表明IAV感染A549细胞后宿主TSPOAP1-AS1的表达显著上调,并且其表达趋势与Ifnb1及病毒M基因的表达趋势一致,提示TSPOAP1-AS1的表达与IAV复制和细胞的抗病毒天然免疫应答潜在相关。选取不同器官或组织来源的人源细胞系,检测其内TSPOAP1-AS1的表达水平,结果表明TSPOAP1-AS1是一个广谱表达的lncRNA。TSPOAP1-AS1的核质分布实验证实其在细胞核和细胞质中均有分布,IAV感染后,核质比显著增加,更多的TSPOAP1-AS1存在于细胞核中。其次,为了确定TSPOAP1-AS1表达是否是细胞特异性的应答IAV感染的产物,分别检测Polyinosinic:polycytidylic acid(poly I:C)、细菌脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)、顺铂(cisplatin)和血清饥饿处理后的A549细胞内TSPOAP1-AS1的表达水平,结果表明TSPOAP1-AS1的表达水平随polyI:C处理时间进程显著增加,且呈现明显的剂量依赖关系,而LPS、cisplatin和血清饥饿处理均不显著影响TSPOAP1-AS1表达,可见TSPOAP1-AS1的表达异常是细胞特异性的应答IAV感染的产物。为了明确参与TSPOAP1-AS1表达调控的信号通路,利用信号通路抑制剂,并辅以过表达等技术手段证实IAV感染后激活的NF-κB信号通路参与了TSPOAP1-AS1的转录调控。最后,为了探讨TSPOAP1-AS1在IAV感染中的角色,分别通过转染pcDNA3_TSPOAP1-AS1质粒和siRNA实现A549细胞内TSPOAP1-AS1的过表达或表达抑制,随后检测了病毒复制(mRNA、蛋白质和病毒粒子水平)和细胞抗病毒天然免疫应答(ISRE荧光素酶报告基因的转录激活、Ifnb1和ISGs表达)相关的一系列指标。结果表明过表达TSPOAP1-AS1显著促进了IAV复制;相反,应用siRNA抑制细胞内源性TSPOAP1-AS1的表达则抑制了病毒的复制。此外,过表达TSPOAP1-AS1显著抑制了IAV诱导的ISRE转录激活、Ifnb1和ISGs基因的表达;反之,抑制TSPOAP1-AS1的表达则促进了IAV感染所致的ISRE转录激活、Ifnb1和ISGs基因的表达。这些结果说明TSPOAP1-AS1是一个宿主抗病毒天然免疫应答的负调控因子,并可为IAV所用以利于自身的复制增殖。综上所述,本研究发现和鉴定了TSPOAP1-AS1的新功能,揭示了IAV抑制或弱化宿主抗病毒免疫应答的一个新机制,即借助TSPOAP1-AS1的I型IFN负调控功能抑制宿主抗病毒天然免疫应答,最终有利于病毒自身的复制和增殖。