猪捷申病毒8型VP1基因重组腺病毒的构建与免疫原性分析

来源 :黑龙江八一农垦大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sms126
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猪捷申病毒(Porcine teschovirus, PTV)感染猪后可引起严重或轻度的神经紊乱、繁殖障碍、肺炎、腹泻、心包炎和心肌炎以及皮肤损伤等症状。同时PTV还可与猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病毒(PRV)等一起引起猪的混合感染,进而容易影响疾病的鉴别、诊断,因此给养猪业造成经济损失。为了更好的了解以及为预防PTV感染做疫苗储备,进行了本研究,构建了含PTV-8VP1基因的重组腺病毒,并进行了免疫原性分析。根据PTV-8jilin/2003VP1基因序列设计并合成一对引物,可扩增全长VP1基因;获得VP1基因后,将其插入到腺病毒穿梭质粒中获得重组穿梭质粒,分别进行PCR、酶切、测序鉴定;鉴定正确以后,重组穿梭质粒经PmeⅠ酶切线性化后,电转化至携带有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞中,获得含有VP1基因的重组腺病毒质粒,利用PCR和酶切鉴定,转染293细胞,成功包装出含VP1基因的重组腺病毒,经RT-PCR、间接免疫荧光(IFA)及Western blot试验证明VP1基因在293细胞中获得表达。通过对VP1基因稳定性检测证明VP1基因稳定存在于重组腺病毒中,病毒一步生长曲线表明构建的重组腺病毒增殖规律与亲本毒没有明显差异。利用重组腺病毒免疫3周龄PTV阴性仔猪,3周后加强免疫一次,首免前和免疫后每周采血一次,分别利用中和试验、间接ELISA试验检测血清抗体,分析体液免疫应答情况。同时利用淋巴细胞增殖试验检测淋巴细胞增殖,分析细胞免疫应答水平。动物实验结果表明重组腺病毒免疫猪后,可诱导机体产生体液免疫和细胞免疫应答。
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