明日叶查尔酮对小鼠肝癌细胞PCNA和BCL-2蛋白表达的研究

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目的:为了探讨明日叶查尔酮对肝癌细胞增殖活性的抑制作用,这次实验采用了体外细胞培养和动物实验相结合的方法,观察明日叶(Angelica keiskei Koidzumi)查尔酮(chalcone)对肝癌细胞增殖活性的抑制作用、对小鼠肝癌组织PCNA和BCL-2蛋白表达的影响及抑瘤率等指标。方法:1体外实验:用RPMI1640培养液(含有10%胎牛血清)将小鼠H22肝癌细胞密度调节至1×105个/ml,接种入96孔培养板,在37℃、5%CO:的培养箱中培养24h。肿瘤对照组加入无血清的RPMI1640培养液,实验组将明日叶查尔酮分成3个浓度,每个浓度做4个附管,每孔加入100ul明日叶查尔酮,使其终浓度分别为10、20、40ug/ml,用MTT法测定细胞增殖活性。2动物实验:健康昆明种小鼠50只,体重18-20g,在本实验室适应性喂养-周后用做实验。在无菌的条件下,抽出传代接种H22肝癌细胞株第六天的小鼠腹水,在健康小鼠的右侧腋窝处,每只小鼠皮下接种0.2ml。健康小鼠接种24h后,将已经接种瘤细胞的小鼠随机分为5组,每组10只。环磷酰胺组按照20mg/kg的剂量给小鼠腹腔注射,隔天一次;高、中、低查尔酮剂量组分别灌查尔酮水溶液40、20、5mg/kg,经口灌胃,每天一次;肿瘤对照组按同样方法灌等量生理盐水,连续10天。最后一次给药后的第2天将小鼠处死(脱颈椎),无菌的条件下剥离小鼠瘤组织测定出细胞增殖活性,用免疫组化法检测小鼠肝癌组织中PCNA和BCL-2蛋白的表达,用电子天平测量小鼠瘤重,并计算抑瘤率。结果:1体外实验结果:小鼠肝癌细胞H22体外培养20和40 ug/ml的明日叶查尔酮组,培养24h的细胞增殖活性分别为0.835±0.028、0.714±0.018,肿瘤对照组则为1.134±0.031,各组间差异有显著性意义(P<0.05),随着明日叶查尔酮剂量的增加,各组肝癌细胞增殖活性依次降低。2动物实验结果:①小鼠肝癌细胞增殖活性:高剂量明日叶查尔酮组肝癌细胞增殖活性水平为0.716±0.018,肿瘤对照组为1.135±0.032,两者差异有显著性意义(P<0.05)②PCNA蛋白表达水平:肿瘤对照组和高剂量明日叶查尔酮剂量组PCNA蛋白阳性表达率分别为72.77%和28.33%,经检验,差异有显著性(P<0.05)。③BCL-2蛋白表达水平:肿瘤对照组和高剂量明日叶查尔酮剂量组BCL-2蛋白阳性表达率分别为65.17%和16.17%,经检验,差异有显著性(P<0.05)。④抑瘤率:肿瘤对照组和高剂量明日叶查尔酮组平均瘤重分别为0.55±0.23g和0.31±0.05g,二者差异有统计学意义(P<0.05),高剂量组肿瘤生长抑制率达43.64%。结论:1明日叶查尔酮对小鼠H22肝癌细胞增殖活性有一定的抑制作用。2明日叶查尔酮可以降低小鼠肝癌组织中PCNA蛋白的表达水平。3明日叶查尔酮可以降低小鼠肝癌组织中Bcl-2蛋白的表达水平,诱导小鼠肝癌细胞凋亡。4明日叶查尔酮可以抑制小鼠肝癌细胞生长,在预防和治疗肝癌疾病方面,在开发和利用明日叶的功效生物学方面,可以提供科学的依据。
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