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目的:本研究通过检测P53、血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)及聚酰苷二磷酸核糖聚合酶-1(Poly-ADP ribose polymerase-1,PARP-1)分子在正常输卵管伞端(Umbrella of normal fallopian,UNF)、卵巢浆液性交界性肿瘤(Ovarian Serous borderline tumor,OSBT)及高级别浆液性卵巢癌(High grade serous ovarian cancer,HGSOC)中的蛋白表达及基因突变情况,从而探究它们在HGSOC的发生、发展中的作用及与临床病理特征、预后的关系。方法:1.标本来源于遵义医科大学附属医院病理科2008年01月-2019年12月手术切除的卵巢肿瘤病例共纳入114例,依据2014年世界卫生组织(World HealthOrganization,WHO)女性生殖器官肿瘤分类中的卵巢浆液性肿瘤诊断标准:其中有OSBT14例、HGSOC100例,另选取UNF23例做正常对照。2.采用免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)Envision法分别检测P53、VEGF和PARP-1蛋白在UNF、OSBT及HGSOC中的表达情况,并应用图像分析软件Image-ProPlus分析蛋白表达强度。3.应用下一代测序法(Next generation sequencing,NGS)检测10例UNF、14例OSBT、38例HGSOC中p53基因、vegf基因和parp-1基因的突变情况。4.结合随访资料分析HGSOC中P53、VEGF和PARP-1蛋白表达及基因突变与患者临床病理特征及预后的关系。5.数据采用SPSS 17.0软件进行统计学分析,计数资料采用χ~2检验及Fisher确切概率法,多组定量资料比较采用ANOVA,两组独立样本定量资料采用t检验。以Kaplan-Meier法进行单因素生存分析。按照α=0.05为检验水准,P<0.05表示差异具有统计学意义。结果:1.P53、VEGF、PARP-1蛋白在UNF、OSBT、HGSOC中的表达及强度:P53在UNF、OSBT、HGSOC中的阳性表达率分别为0%、28.6%、94.0%,随着病理分级的增高,P53阳性表达逐渐增高(P<0.05)。VEGF在UNF、OSBT、HGSOC中的阳性表达率分别为17.4%、71.4%、92.0%,随着病理分级的增高,VEGF阳性表达逐渐增高(P<0.05)。PARP-1在UNF、OSBT、HGSOC中的阳性表达率分别为17.4%、64.3%、91.0%,随着病理分级的增高,PARP-1阳性表达逐渐增高(P<0.05)。P53在UNF、OSBT、HGSOC中的MOD值分别为0.01、0.04、0.14,随着病理分级的增高,P53蛋白表达强度逐渐增强(P<0.05)。VEGF在UNF、OSBT、HGSOC中的MOD值分别为0.02、0.07、0.17,随着病理分级的增高,VEGF蛋白表达强度逐渐增强(P<0.05)。PARP-1在UNF、OSBT、HGSOC中的MOD值分别为0.02、0.09、0.15,随着病理分级的增高,PARP-1蛋白表达强度逐渐增强(P<0.05)。2.p53、vegf、parp-1基因在UNF、OSBT、HGSOC中的突变情况:p53、vegf、parp-1基因在UNF、OSBT中突变率均为0。在HGSOC中p53、vegf、parp-1的基因突变率分别为97.4%、2.6%、10.5%。p53及vegf突变率差异比较具有统计学意义(P<0.05),p53及parp-1突变率差异比较具有统计学意义(P<0.05),vegf及parp-1突变率差异比较没有统计学意义(P>0.05)。HGSOC中p53基因的突变类型为体系突变,其突变位点为第4外显子、第5外显子、第6外显子、第7外显子、第8外显子以及第4内含子、第6内含子,其中突变率最高的是第5外显子为29.7%(11/37),突变方式为错义或移码突变。parp-1基因的突变类型为体系突变,其突变位点为第7外显子、第9外显子及第15外显子,其中突变率最高的是第7外显子为50.0%(2/4),突变方式为错义突变。vegf为基因拷贝数异常(Copy number variations,CNV),没有明确的突变位点。因此,本研究中HGSOC的p53基因突变率最高,其次是parp-1基因,vegf为CNV。3.P53、VEGF及PARP-1蛋白表达和基因突变在HGSOC中相关性分析及Kappa一致性检验:Spearman相关分析得出:P53蛋白与VEGF蛋白表达的相关系数r=0.702,呈正相关,示P53蛋白阳性表达越高则VEGF阳性表达越高,组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。P53蛋白与PARP-1蛋白表达的相关系数r=0.509,呈正相关,示P53蛋白阳性表达越高则PARP-1阳性表达越高,组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。PARP-1与VEGF蛋白表达情况没有相关性,组间比较差异不具有统计学意义(P>0.05)。Kappa一致性检验示:38例HGSOC同时行了NGS测序和IHC检测。p53基因:κ=1.000,P<0.05,提示两种方法的检测结果存在一致性,一致性好。vegf基因:κ=0.003,P>0.05,提示两种方法的检测结果一致性较差。parp-1基因:κ=0.020,P>0.05,提示两种方法的检测结果一致性较差。4.P53、VEGF及PARP-1在HGSOC中的蛋白表达、基因突变情况与患者的临床病理特征的关系:P53、VEGF及PARP-1蛋白的阳性表达均与患者的国际妇产科联合会分期(International Federation of Gynecology and Obstetrics,FIGO)(P<0.05)、淋巴结转移状态密切相关(P<0.05),即三种分子的阳性表达越高,患者发生淋巴结转移的几率越高且FIGO分期越高,但是均与患者年龄、腹膜转移及化疗耐药等临床病理特征无关(P>0.05)。38例HGSOC患者中p53基因突变与患者FIGO分期有关(P<0.05),发生p53突变的患者的FIGO分期比未发生p53突变患者的分期高,p53突变情况与患者其他病理特征无关(P>0.05)。vegf及parp-1基因突变与患者的临床病理特征均无关(P>0.05)。5.P53、VEGF及PARP-1蛋白表达及基因突变与HGSOC患者预后的关系:HGSOC患者的3年生存率为36.4%(28/77),5年生存率为12.5%(4/32)。Kaplan-Meier生存分析:P53蛋白阳性表达与HGSOC组患者的总生存时间存在统计学意义(P<0.05),即P53蛋白阳性的患者其总生存时间比P53蛋白阴性患者的总生存时间短。而VEGF、PARP-1蛋白的阳性表达均与HGSOC患者的总生存时间无统计学意义(P>0.05)。此外parp-1基因突变与HGSOC组患者的总生存时间存在统计学意义(P<0.05),即发生parp-1基因突变患者的总生存时间比未发生parp-1突变患者的总生存时间短。而p53、vegf基因突变与患者的总生存时间均没有统计学意义(P>0.05)。结论:1、P53、VEGF及PARP-1蛋白表达可能参与了HGSOC发生发展的过程,且还可能有助于辅助HGSOC诊断及鉴别诊断。2、P53分别与VEGF、PARP-1蛋白在HGSOC中存在正相关关系,提示P53与VEGF、PARP-1蛋白在HGSOC中可能存在协同作用。3、P53在HGSOC中蛋白表达、基因突变均与患者的FIGO分期有关,且P53蛋白表达与患者的总生存时间有关,提示P53可用以评价HGSOC患者的预后。P53蛋白应用IHC检测即可作为p53突变的替代标记物。4、VEGF蛋白的表达与患者的淋巴结转移、FIGO分期有关,提示VEGF可能与HGSOC的高侵袭性有关。5、HGSOC中发生parp-1基因突变的患者,其总生存时间比未发生parp-1突变患者的总生存时间短,parp-1基因可能与患者的预后有关。