论文部分内容阅读
中药复方以中医辨证理论为指导,按照君臣佐使的原则组药成方,其成分复杂,具有多途径、多靶点的特点,对其进行有效的质量控制和较全面的药效评价成为近年来讨论焦点。复方中药有效组分配伍与机制研究是中医药现代化的突破点,从现代科学的角度阐述中药复方的多组分、多靶点作用机理,可以更深刻地认识中药复方的药效基础。芙朴感冒颗粒在临床上应用广泛,但相关药效物质基础和活性机理研究甚少。本课题基于液相色谱质谱联用技术,以小鼠巨噬细胞RAW264.7与芙朴感冒颗粒共同孵育的细胞提取液为研究对象,通过探究胞内成分快速鉴定出潜在活性成分。进一步探讨潜在活性成分及配伍的毒性、抗炎活性、抗癌活性指标,阐明活性成分配伍规律及可能的活性作用机制。本文主要分为如下三个部分:1.芙朴感冒颗粒潜在抗炎活性成分筛选及其定量研究。以小鼠巨噬细胞RAW264.7与芙朴感冒颗粒共同孵育的提取液为研究对象,采用LC-MS方法对其筛选成分进行分离和鉴定,从提取液中共检测出6种潜在活性成分,通过与标准品对比,鉴定出这6种化合物分别是橙皮苷、牛蒡子苷、牛蒡子苷元、川陈皮素、厚朴酚以及和厚朴酚。同时采用HPLC-QqQ-MS~n液质联用仪的MRM模式对复方中6种潜在活性成分进行快速定量,并同时对6个不同批次制剂进行了含量检测。研究表明所建立的定量方法准确度、精密度和稳定性等各项内容均符合要求,该方法准确、灵敏、可靠,可为该制剂的多指标质量控制提供参考。2.芙朴感冒颗粒主要成分体外抗炎活性研究。以LPS诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7为体外抗炎模型,以6种潜在活性成分为主要研究对象,采用MTT法先确定药物安全浓度,进一步采用Griess法检测6种化合物对LPS刺激的RAW264.7细胞NO表达水平的影响,此外,对活性成分的配伍进行药效评价,研究结果经细胞因子(TNF-α和IL-6)进行药效验证。3.芙朴感冒颗粒主要活性成分及复方抗肿瘤作用的探索。以非小细胞肺癌细胞A549为肿瘤模型,采用MTT法检测不同药物浓度和时间对A549的细胞存活率的影响。实验表明复方、3种单体和配伍组对体外培养的肺癌A549细胞的生长均具有一定的抑制作用。