苹果腐烂病是由Valsa mali Miyable et Yamada引起的一种真菌性病害。中国于1916年在辽宁南部发现该病,1948-1949年及1960年曾两度在辽南地区大流行,造成了严重的经济损失。随着化学农药引起的环境污染以及人们公认的3R(抗性、残毒、再猖獗)问题的出现,利用自然环境中的拮抗微生物防治植物病害愈来愈受到人们的重视。本文旨在从广东省中山市采集的土样中分离、筛选出对苹果腐烂病菌有较强拮抗作用的放线菌,并对拮抗菌株进行初步鉴定及对其发酵条件进行研究,以期为苹果腐烂病的防治提供新的解决方案。主要研究内容及结果如下:1对从广东省采集的土样进行热处理及化学处理,以降低常规放线菌的出现几率,然后通过稀释平板法对原土样及处理土样同时进行分离,共获得放线菌293株。其中,未处理、热处理及苯酚处理的土样分离得到的菌株数量分别为214、22、57株,试验结果表明,经过一定处理的土样分离得到菌株的数量明显减少,同时稀有放线菌的数量可能有所增加。2以苹果腐烂病菌为指示菌对分离菌株进行筛选,平板对峙法初筛得到有抑制作用的菌株61株,其中抑菌率在50%以上的14株,占总数的4.78%;管碟法进一步对拮抗效果明显的菌株进行复筛,试验数据表明,菌株Z-6的发酵滤液对苹果腐烂病菌抑制作用最显著,抑菌圈直径达32.87 mm。为了测定该菌株对苹果腐烂病的防治效果,本文还进行了苹果离体枝条防治效果试验,结果表明,该菌株的防治效果达32.9%。3采用插片培养的方法,以观察菌株的培养特征、形态特征尤其是孢子及孢子丝的形态特征为主,生理生化特性、抑菌谱测定为辅的传统方法,初步鉴定菌株Z-6为链霉菌属(Streptomyces spp.)的金色类群(Aureus)。同时,抑菌谱测定结果表明,菌株Z-6不仅对苹果腐烂病菌抑制效果明显,对其他16种供试病原真菌同样有一定程度的抑制作用。尤其对小麦全蚀病菌、番茄灰霉病菌和稻瘟病菌效果明显,抑制率均在70%以上。4经平板对峙培养发现,苹果腐烂病菌生长缓慢,周围有红褐色物质产生,说明菌株Z-6产生或分泌某种物质从而抑制病原菌的生长。挑取病原菌菌苔边缘菌丝镜检,发现菌丝表现为念珠状、畸形、扭曲,顶端中空、膨胀,形成大量囊状体。在发酵滤液对病原菌丝生长的测定中,菌株Z-6发酵原液基本完全抑制病原菌菌丝的生长,其作用强度随无菌滤液稀释倍数的增加而减弱。稀释1000倍液时基本无抑制作用。综上所述,菌株Z-6对病原菌的作用机理是产生抗菌物质直接破坏病原菌菌丝正常生长。5为了提高菌株Z-6抑菌活性物质的产量,增强其对苹果腐烂病菌的拮抗效果,本文通过正交设计试验,对菌株Z-6的发酵培养基的成分及发酵条件进行优化。最终确定培养基最佳配方为:葡萄糖35.5g/L,玉米粉30.0 g/L,黄豆饼粉27.7g/L,碳酸钙3.0 g/L,淀粉10.0g/L,氯化铵3.0g/L;其最佳培养条件为:菌龄为120h,接种量4个(φ5 mm),发酵时间72h,培养基初始pH 6.0,培养基装量80 mL(250mL三角瓶),发酵温度28℃,摇床转速180 r/min。