中药泽漆抗菌活性成分研究

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本论文旨在研究中药泽漆的体外抗菌活性成分及其作用方式。基于中药材提取物的抗菌活性初筛,确定进一步研究的目标植物为泽漆后,通过活性导向的植物化学成分提取、分离和鉴定,对大戟科植物泽漆中的抗菌成分进行单用的活性测定及其与常用抗生素联合进行抗菌作用的系统评价。论文由四部分构成,第一部分对21种常见的中药材提取物进行体外抗菌活性初筛,发现泽漆、鸡冠花等13种中药材的体外抗菌活性较好,具有广谱抗菌活性。第二部分对泽漆提取物进行抗菌活性追踪分离,得到活性部位的化学成分并鉴定其结构。第三部分第一节对分离得到的化合物和文献报告过的泽漆中11种化合物通过进行体外抑菌活性初筛,筛选出体外抑菌活性较好的单体化合物。第二节将第一节中筛选出的体外抑菌活性较好的化合物与临床中常用的6种抗生素(青霉素、亚胺培南/西司他丁、阿米卡星、头孢曲松、氨苄西林、哌拉西林/他唑巴坦)通过微量棋盘式稀释法和时间杀菌曲线法测定其联合作用方式,筛选出具有协同抑菌和协同杀菌作用方式的组合,为临床应用提供一定的参考。第四部分将金黄色葡萄球菌标准菌(CMCC(B)26003)和耐甲氧西林金黄色葡萄菌(MRSA166)通过不同浓度甘草查尔酮A处理之后,在扫描电镜下收集图像,观察经过化合物处理之后细菌表面结构变化。再通过CCK8法测定甘草查尔酮A对人肺腺癌细胞株A549和人胃癌细胞株NCI-N87的细胞毒性,观察甘草查尔酮A的细胞毒性。通过生物活性导向分离的方法,采用琼脂打孔法和微量倍比稀释法测定萃取层及分段物活性,将有活性的萃取层及分段物通过硅胶柱等进行分离并结合波谱数据(1H NMR、13C NMR)与文献对比确定单体化合物的结构。从泽漆中共分离鉴定了6个已知化合物,分别是化合物1(硬脂酸乙酯)、化合物2(β-谷甾醇)、化合物3(大戟苷)、化合物4(棕榈酸)、化合物5(没食子酸)以及化合物6(槲皮素)。其中化合物3(大戟苷)为泽漆中特征性化学成分,属于假白榄酮型酯。受试单体化合物体外抗菌活性测定结果显示:分离得到的6个和市售11个化合物中有11个化合物对各标准菌及其耐药菌菌株均有一定的抑菌作用。其中杨梅素以及甘草查尔酮A单体化合物对MRSA活性较好。棋盘法结果显示甘草查尔酮A与青霉素等6种抗生素联合作用于10株MRSA菌株,多数表现为协同或相加作用,少数表现为无关或拮抗作用。时间杀菌曲线结果显示甘草查尔酮A与抗生素联用时,其中两个组合表现出协同杀菌作用,其余大部分为相加作用,少部分表现为协同及拮抗作用。扫描电镜及细胞毒性结果显示:在8MIC和4MIC浓度时细菌数量较少且没有出现明显的聚集,当1MIC到1/4MIC时细菌数量开始增多。在8MIC至2MIC药物作用后,细菌形态没有出现明显改变。甘草查尔酮A对2种肿瘤细胞增殖抑制作用均呈现明显的量-效关系,对A549细胞及NCI-N87细胞IC50分别为86.15μg/ml、46.72μg/ml。本论文研究成果初步明确了中药泽漆抗菌活性物质基础,为进一步开发泽漆药材资源,探讨泽漆抗菌成分及其作用方式以克服临床耐药菌感染问题提供了科学依据。
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