论文部分内容阅读
目的:探讨CD147和CAS在不同类型睾丸生殖细胞肿瘤中的表达水平和定位,在细胞水平研究两种分子对睾丸生殖细胞肿瘤细胞系NT-2细胞增殖、细胞迁移和细胞侵袭两种生物学行为的影响以及其作用的分子机制,为早期诊断和治疗睾丸生殖细胞肿瘤提供依据。方法:(1)采用免疫组化染色方法对正常人睾丸组织和不同类型睾丸生殖细胞肿瘤组织进行CD147和CAS两分子染色,分别比较两分子在正常睾丸组织和不同类型睾丸生殖细胞肿瘤中表达水平和定位差异。(2)实验组利用腺相关病毒(AAV)沉默睾丸生殖细胞肿瘤细胞系NT-2细胞中CD147和CAS的表达,对照组转染空载体。通过PCR、qPCR和western blot三项分子生物学技术从mRNA和蛋白水平验证AAV介导的NT-2细胞中CD147和CAS两分子的沉默效果。(3)利用CCK-8细胞活力检测实验检测对照组与实验组细胞生长活力差异。(4)利用Transwell细胞迁移实验和细胞侵袭实验研究沉默NT-2细胞中CD147和CAS对细胞迁移能力和侵袭能力的影响。(5)采用Western blotting技术检测实验组和对照组中,与细胞分裂、增殖相关的信号分子的变化。结果:(1)免疫组化染色结果显示,CD147在正常睾丸组织中不表达,在不同类型TGCTs中均不同程度表达于细胞膜上。精原细胞瘤、卵黄囊瘤和畸胎瘤中,CD147呈低~高水平表达。CD147在不同类型TGCTs中的表达水平均显著高于正常睾丸组织。在精原细胞瘤中,对CD147在不同TNM分期精原细胞瘤中的表达水平进行比较发现,T1N0M0分级的精原细胞瘤组织中CD147表达水平显著低于T2N0M0分级和T4N0M0分级(p=0.0173和p=0.0467)。CD147的表达水平在T2N0M0分级和T4N0M0分级的精原细胞瘤组织无显著差异。CD147在精原细胞瘤和非精原细胞瘤中的表达水平亦没有显著差异(2)CAS在正常睾丸组织和不同类型TGCTs中的定位有差异。正常人睾丸组织中,CAS主要定位于精母细胞核中,成熟精子中无表达。正常睾丸组织和精原细胞瘤间,CAS的表达水平无显著差异,而在精原细胞瘤和胚胎瘤中,CAS主要定位于细胞质。畸胎瘤中,CAS表达水平很低,在细胞核和细胞质均有表达。卵黄囊瘤中,CAS主要表达于细胞核。正常睾丸组织和精原细胞瘤中CAS的表达水平显著高于非精原细胞瘤。(3)PCR、qPCR和western blot结果表明,AAV介导的NT-2细胞中CD147和CAS沉默效果显著。(4)细胞活力检测实验结果表明,沉默NT-2细胞中CD147和CAS的表达,会导致细胞增殖能力显著下降。(5)细胞迁移和细胞侵袭实验结果表明,沉默NT-2细胞中CD147和CAS的表达,对睾丸生殖细胞肿瘤细胞迁移能力和侵袭能力无影响。(6)Western blotting技术研究结果显示,实验组与对照组相比,沉默NT-2细胞中CD147后,NF-κB信号通路中,调控NF-κB信号通路分子TRAF2的表达下调。经典NF-κB信号通路分子p100分子的表达水平没有变化,p50和p65的表达水平下调。非经典NF-κB信号通路分子RelB的表达水平显著下降。(7)沉默NT-2细胞中CAS后,抗凋亡因子Bcl-2和BCL-xl表达下调。而调控细胞周期分子p53的表达水平无明显变化。NF-κB信号通路中,经典NF-κB信号分子p65和非经典NF-κB信号分子RelB的表达水平显著下降。结论:(1)CD147在不同类型TGCTs中均有表达,在正常睾丸组织中不表达。(2)精原细胞瘤中,CD147在T2N0M0分级和T4N0M0分级中的表达高于T1N0M0分级。(3)正常睾丸组织中,CAS主要定位于精母细胞核中。精原细胞瘤和胚胎瘤中,CAS主要定位于细胞浆。(4)CD147和CAS可通过NF-κB信号通路促进睾丸生殖细胞肿瘤细胞生长和增殖。(5)CD147和CAS对睾丸生殖细胞肿瘤癌细胞迁移和侵袭能力无影响。