近年来,由于革兰氏阴性菌对传统抗生素的耐药性逐渐增加,对人类健康和生命构成较大威胁,迫切需要研发新型抗生素来对抗不断发展的耐药菌。抗菌肽作为天然免疫的重要组成部分,广泛存在于微生物、昆虫、两栖动物、哺乳动物、和植物中。由于抗菌肽具有独特的、非特异性的、细胞膜靶向的杀菌机制,因此细菌不易对抗菌肽产生耐受。同时,大多数抗菌肽具有广谱抗菌活性,是一类非常有前景的抗菌分子。但合成成本高,体内活性有限,酶解稳定性差,毒副作用大等缺点,限制了抗菌肽的进一步发展。Jelleine-1（Pro-Phe-Lys-Leu-Ser-Leu-His-Leu-NH2）是最初从蜂王浆中分离得到的,仅含有8个天然氨基酸的抗菌肽,是一种典型的两亲性抗菌肽,具有广谱抗菌活性和较低的体内外毒性,特别是jelleine-1对革兰氏阴性菌表现出一定的选择性。但是其抗菌活性一般,本研究为了提高其抗菌活性,增强其对多药耐受的革兰氏阴性菌的抗菌能力,设计、合成了15个jelleine-1类似物,并对其体内外抗菌活性和毒性进行了研究。实验结果表明,在保持母肽序列中1、4、6、8位不变的情况下,通过在3、5、7位进行氨基酸取代,对母肽序列的阳离子性、电荷和极性进行微调,可以显著提高jelleine-1的生物活性。同时,我们发现色氨酸取代苯丙氨酸也能提高jelleine-1的抗菌活性。在所有类似物中,富含精氨酸和亮氨酸的类似物15对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性细菌都表现出最强的抗菌活性,并且保持了母肽对革兰氏阴性菌选择性的特征,特别是类似物15在体内外对多药耐受的铜绿假单胞菌均有较强的抗菌活性。此外,类似物15对多药耐受的铜绿假单胞菌生物膜的形成具有一定的抑制作用。内外膜实验结果显示,类似物15与母肽作机制一致,主要是通过膜破环机制杀死细菌。最后,本研究通过细胞毒性实验、溶血实验、血常规检测和血液生化分析实验结果得出,类似物15在体内外均表现出很低的毒性。总之,本研究通过氨基酸替换策略得到了富含精氨酸和亮氨酸的类似物15,其抗菌活性较母肽有显著提高,同时保持了母肽低毒性的优势,在对抗多药耐受的革兰氏阴性菌的感染中具有一定的应用潜力。