胎盘分泌的激素在人类妊娠中起着重要作用。研究表明人类胎盘可合成和分泌一种下丘脑神经内分泌激素——促肾上腺皮质激素释放激素（corticotropinreleasing hormone，CRH），这种激素不但影响胎儿的发育与成熟、还通过多种途径参与分娩启动，且与早产、胎儿官内发育迟缓等疾病有关。因此，研究胎盘CRH合成与分泌的机理，不仅有助于揭示人类分娩启动机制和胎儿生长发育的机理，还可为早产、宫内发育迟缓等疾病的治疗提供理论依据。 体内多种因子可调节胎盘CRH的分泌。与妊娠过程密切相关的雌激素和孕激素对胎盘细胞CRH基因转录的调节及其机制尚不清楚。本研究利用原代培养的人类胎盘滋养层细胞进行了以下三方面的研究：1、观察雌二醇（estradiol，E₂）抑制胎盘CRH基因表达是否发生在转录水平；明确是何种雌激素受体亚型介导了雌激素的作用；确定CRH基因中与雌激素调节作用有关的DNA序列。2、首先观察原代胎盘细胞中糖皮质激素受体（GR）和孕激素受体（PR）的表达情况，在此基础上，进一步研究孕激素（progesterone，P₄）对胎盘CRH基因的转录调节；GR和PR在孕激素调节胎盘CRH基因转录活性中的作用，以及CRH基因启动子中与孕激素调节作用有关的反应元件。3、观察PKA、PKC激动剂对胎盘CRH基因转录的调节作用以及雌激素和孕激素对PKA、PKC诱导的CRH基因转录的影响。 主要实验结果和结论如下： 1．雌激素对胎盘CRH基因转录活性的调节作用：E₂(10^-7M)可抑制CRH基因的转录，这种作用具有时间和剂量依赖性。雌激素受体拮抗剂ICI182780(10^-6M)不但能够阻断E₂对胎盘CRH基因转录活性的抑制作用，而且其本身还可促进CRH基因的转录。将ERα、ERβ表达载体分别与CRH报道基因共转染胎盘细胞，E₂及ICI只对ERα过度表达细胞的CRH基因转录活性有明显的调节作用，说明雌激素及其受体拮抗剂对胎盘CRH基因转录的作用是由ERα介导的。用5’端缺失的方法确定与雌激素调节作用相关的DNA片段，结果显示位于CRH启动子区-248至-213之间的碱基序列是硕士学位论文 中文摘要雌激素抑制CRH基因转录的关键序列。将此序列中的共享CAMP反应元件（CAMPresponse ele灿nt，CRE）突变后，雌激素的作用消失。雌激素还可抑制含有 CRE的兔珠蛋白基因的转录，这说明雌激素抑制CRH基因转录是通过该基因启动子中的CRE实现的． 2．孕激素对胎盘 CRH基因转录活性的调节作用：Western Blot的方法显示胎盘细胞表达大量的加和少量的叩A和mB，其中叩B的表达大于叫A的表达。用孕激素受体持抗剂RU38486（10－‘M）处理或用 trilostane（10－‘M）抑制内源性孕激素的产生均可促进CRH基因转录，而已可抑制RU或trilostane对胎盘CRH基因转录的促进作用，提示内源性孕激素可抑制胎盘CRH基因的转录．将PRA、PRB和GR表达载体分别与 CRH报道基因共转染入胎盘细胞，当 PRA或 GR过度表达时，P．＊－V)不仅能抑制CRH基因的转录，还可阻断RU和trilostane对CRH基因转录的上调作用；细胞过度表达 PRB后，RU38486（10－‘M）和 trilostane（10－‘M）反而抑制 CRH基因的转录，而 P／10－“)却上调 CRH基因的转录活性。这表明孕激素对胎盘 CRH基因转录的调节作用是与PRA、PRB和GR共同作用的结果．孕激素对胎盘基因转录的抑制作用也是通过CRH基因启动子中的CRE实现的．由此可见，CRH基因中的CRE是群体激素调节胎盘CRH基因的关键元件。 3．PKA激活剂 8－－B，CAMP（10－‘M和外C激活剂 PMA（10－‘M）均可促进胎盘mH基因的转录，CRE是比A、PKC促进出H基因表达的关键元件，说明胎盘细胞内比A和PKC信号途径在CRE有交叉对话。民和P／制PKA和PKC对CRH基因的上调作用。 以上结果表明：1）雌激素抑制胎盘化H基因的转录，CRH基因中的CRE是雌激素抑制 CRH基因表达的关键元件，这种作用是由 ER a介导的。2)孕激素也可抑制 CRH基因转录，孕激素与GR、PRA作用抑制CRH基因表达，与PRB作用促进CRH基因表达，孕激素对CRH基因的作用也是通过该基因启动子中的CRE实现的。3)PKA和PKC可通过比H基因中mE元件诱导mH基因的表达，提示出A和队C信号途径在 CRE处发生交叉对话。