中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)卵巢及肝胰腺消减文库的构建及分析

来源 :上海海洋大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:q158166828
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中国明对虾,是我国重要的海水养殖种类,属节肢动物门、甲壳纲、十足目、对虾科、明对虾属。本研究中通过外部观察、性腺指数以及石蜡切片的方法并参照前人研究将中国明对虾的卵巢发育分为卵原细胞增殖期、卵黄发生前期、初级卵黄发生期、次级卵黄发生期和消退期等五个时期。然后利用抑制性消减杂交技术(SSH)分别构建卵原细胞增殖期和初级卵黄发生期的卵巢和肝胰腺的正反向消减文库以及卵黄发生前期和消退期卵巢和肝胰腺的正反向消减文库,测序结果与GenBank进行BLASTx同源比较,并利用GO分析进行功能注释,最后选取部分差异表达的基因进行荧光定量PCR技术,研究差异表达的基因在卵巢各个不同发育时期的表达水平及变化,分析这些基因的表达特性与功能之间的关系,以及与卵巢发育之间的关系。消减结果显示,各文库中的差异表达基因与该文库的卵巢发育时期相互吻合。卵原细胞增殖期的卵巢消减文库中筛选到的基因主要参与细胞进程,尤其是与细胞增殖分化(有丝分裂)相关。卵黄发生前期、初级卵黄发生期和消退期筛选到的基因主要是参与蛋白合成、能量代谢及信号传导等基因,推测这些基因可能在卵黄发生和皮质棒的形成等过程中有重要作用。利用荧光定量PCR分别检测了peritrophin mRNA、cytochrome oxidase ImRNA、polehole-like protein mRNA和vitellogenin mRNA等差异表达的基因在卵巢各不同发育时期的表达水平及变化。这些基因表达量在初级卵黄发生期都是最高的。其中polehole-like protein mRNA和vitellogenin mRNA在初级卵黄发生期的表达量是其他时期的几十甚至几百倍。polehole-like protein mRNA在初级卵黄发生期肝胰腺表达量最高,vitellogenin mRNA在初级卵黄发生期的卵巢中表达量最高,显示这两个基因在初级卵黄发生期的卵巢和肝胰腺中较活跃。
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