新基因AK078438的生物信息学分析和初步功能研究

来源 :四川大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:colala2001
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:小鼠基因AK078438是与血管内皮细胞相关的未知功能基因之一,通过网上比对而获得的。本论文就小鼠基因AK078438作些生物信息学分析和初步的功能研究,为今后该基因功能的进一步研究和抗肿瘤的血管生成治疗找寻新的靶点。方法:通过生物信息学的方法分析了小鼠基因AK078438的开放阅读框的位置,以此为基础设计了用反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术扩增出基因的全长开放阅读框(open reading-frame,ORF),验证网上公布的该基因编码区。进一步进行氨基酸序列比对和同源分子进化树分析,并利用GENSCAN和TWINSCAN软件预测了该基因在小鼠基因组中的定位和外显子及内含子的情况。使用RPS-BLAST在线服务器分析了该蛋白的保守结构域;使用SignalP3.0 Server分析该蛋白的信号肽;TMHMM-2.0在线服务分析了该蛋白质的跨膜区,并进一步分析了其蛋白的疏水性。利用SMART在线工具搜索发现该蛋白的化学修饰位点,为其是否参与酶活性调节提供参考依据。运用RT-PCR技术在mRNA水平上检测该基因在正常小鼠组织、肿瘤细胞以及间充质干细胞的分布。并构建该绿色荧光融合蛋白的真核载体转染细胞,观察该蛋白在细胞中的亚细胞定位。用原核载体表达该基因的融合蛋白,亲和层析纯化该蛋白,并分析其理论的分子量是否相符,为制备多抗血清、研究其蛋白质的相互作用,找寻其参与的信号途径提供条件。用MTT(3-(4,5-dimethylthiazo-2yl)-2,5-diphenyl-2,4-terazolium bromide)和流式细胞术的方法检测该基因转染细胞后的凋亡作用。结果:该基因全长ORF证实为1065bp,编码355个氨基酸,与网上公布的编码区相符合,原核表达的蛋白与理论预期的分子量大小相符。该蛋白与多种真核生物具有较高的同源性,在进化过程中保守并与种属亲缘性相关。该基因定位于小鼠的4号染色体4qAl,经分析发现,在小鼠的基因组中由8个外显子和7个内含子组成。进一步分析得到了蛋白的保守结构域为BAR和未知功能的DUF1208,无信号肽,为非分泌型蛋白,具有一些化学修饰位点。通过实验方法得到在mRNA水平上,该基因表达于小鼠的大脑、子宫、结肠、肾脏、睾丸和骨髓,而在心脏、脾脏、肺、肝脏、胃中不表达;在小鼠结肠癌细胞株C26、黑色素瘤细胞株B16、小鼠Lewis肺癌LL/2,间充质干细胞中均有表达,在小鼠肝癌细胞系Hepa,小鼠骨髓细胞瘤NS-1中不表达。该蛋白定位于细胞质中。MTT和流式细胞术的方法初步检测到该基因具有一定的凋亡功能,尚需进一步验证。结论:借助于生物信息学方法了解了AK078438基因可能的性质和功能,通过研究该基因的蛋白表达、亚细胞定位、表达谱分析、凋亡功能的检测,为该基因的功能进一步研究奠定了基础。
其他文献
一、案例简介2007年9月6日,大庆油田矿区服务事业部正式成立,主要负责对油田物业与公用事业(日常物业服务、民用水电气暖供应等)、社会公益性事业(道路养护、防洪排涝、文化体育、
介绍一种单片机温控装置及自动报警系统的软硬件原理。
<正>当前的学校教育正从应试教育向素质教育转变.随着素质教育的深入发展,现在的数学教育理念是:人人学有价值的数学,人人获得必要的数学,不同的人在数学上得到不同的发展.基
思想政治的教学离不开历史视角,只有从历史的视角去实施历史的教学,才能让看似生硬的思想政治知识生动起来,才能让学生高度认同思想政治课程中的教育观点。中国特色社会主义
<正>初高中衔接是一个历史问题,课程改革前全国统一教学大纲统一教材,教学过程中的衔接曾经就是焦点.这是由于不论是课程改革之前还是之后,初、高中阶段的教学要求、思维层次
随着知识与技术的不断创新,信息时代的全面到来,计算机等多媒体成为现代社会是以主的信息时代,计算机技术给人类生产生活方式带来深刻变革。同时,计算机科学技术的出现,为现代教育
MZ调制器是光外调制器的一种,广泛应用于高速光通信系统中。MZ调制器的转换曲线是类余弦函数,在应用时需先设定相应的偏置点。不过由于调制器光电材料本身的特性以及外界环境
随着医学检验的飞速发展,新技术、新方法的不断应用,极大地提高了人们对疾病的新认识,为临床提供了可靠的诊断依据,使人们越来越认识到医学检验的重要性,但是由于我国目前还
本文通过对县级配电系统继电保护存在的常见问题分析,提出了改进继电保护系统、提高配电可靠性的措施。
颗粒离散元方法是离散元方法的一种,其研究对象的强度参数确定过程是非常繁琐的,常规方法必须进行数值计算和室内试验的标定。本文基于PFC软件,编写直接剪切试验程序,通过室