昆明裂腹鱼胚胎发育及早期抗氧化能力研究

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本文以昆明裂腹鱼为研究对象,认识其早期发育阶段形态学、卵黄的消化利用及器官系统发育的基本规律;认识其早期发育过程中抗氧化能力变化情况;认识早期发育过程中生长的特征和生长基因的表达情况,阐述其作用。1.对昆明裂腹鱼胚胎发育特征进行观察。结果显示,昆明裂腹鱼的成熟卵为黄色,卵径为(2.78±0.20)mm,卵重为(14.65±0.52)mg,吸水膨胀后达(4.29±0.14)mm,卵重为(36.65±1.70)mg。在水温(14.27±0.94)℃条件下,受精卵在受精后2.42h胚盘隆起,4.50h进入卵裂期,13.77h进入囊胚期,40.50h进人原肠期,53.22h进入器官形成阶段,165h出膜,胚胎发育有效积温为2508h·℃。初孵仔鱼全长为(11.52±0.51)mm。对各发育时期外部形态特征进行了详细的描述,分析了昆明裂腹鱼胚胎发育特点和昆明裂腹鱼胚胎发育温度要求,发现与其他裂腹鱼的温度和积温相差不大。2.为了认识昆明裂腹鱼早期的生长特征。测定昆明裂腹鱼早期仔、稚鱼的全长和体重,得出总体发育趋势。结果比较分析得出昆明裂腹鱼早期仔、稚鱼最适的生长方程,并通过生长指标来探究其生长特性。结果表明:昆明裂腹鱼1~27日龄全长-体重的幂函数关系为:L=0.00028W4.939,R2=0.806。根据拟合度分析,昆明裂腹鱼早期发育阶段的全长与日龄相关关系用三次函数曲线来表示,其关系式为:L=0.001D~3-0.23D~2+0.512D+11.129,R~2=0.982。体重与日龄的相关关系最接近于三次函数曲线:W_B=-0.008D~3+0.410D~2-3.807D+15.144,R2=0.976。分析表明昆明裂腹鱼1~27日龄呈正异速生长,11日龄时全长的增长速度大于但大于体重的,11~27日龄体重的增长率快较全长快。本研究发现17日龄的昆明裂腹鱼体重增长最大,但其全长确是增长最小的时候,可能与其器官的生长有关,这需要后期的研究。3.为了解昆明裂腹鱼胚胎及仔稚鱼发育过程中抗氧化酶活性的变化,采用生物化学的方法测定了昆明裂腹鱼胚胎及仔稚鱼发育过程中抗氧化酶活性的水平。结果显示:(1)在成熟卵中测定的酶都具有活性。受精卵时的超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶酶活均高于成熟卵,而丙二醛含量、蛋白质羰基含量、乳酸脱氢酶活性和总抗氧化能力均低于成熟卵。(2)胚胎发育时期超氧化物歧化酶活性、过氧化氢酶活性、丙二醛含量和总抗氧化能力逐渐升高至器官形成期,然后降低至出膜前期,谷胱甘肽过氧化氢酶活性活性逐渐降低至器官形成期,随之上升到出膜前期,而蛋白质羰基含量和乳酸脱氢酶活性的变化呈波动性变化。(3)胚后时期,仔鱼在内源营养期到混合营养期阶段,超氧化物歧化酶活性、过氧化氢酶活性、谷胱甘肽过氧化氢酶、丙二醛含量、乳酸脱氢酶活性和总抗氧化能力都是升高,但是蛋白质羰基含量则是降低。结果表明:昆明裂腹鱼鱼胚胎发育主要是T-SOD与GSH-Px在发挥作用;而且昆明裂腹鱼早期发育过程中出膜后受到的氧化损伤比出膜前严重。4.采用RT-PCR与荧光定量PCR技术研究了昆明裂腹鱼早期发育中GH、GHR和IGF-IIa基因表达。结果显示:昆明裂腹鱼的胚胎发育阶段中的GH和GHR基因表达量极低,随着出膜期达到最大值,然后在内源到外源营养期表达水平持续上升;IGF-IIa基因在昆明裂腹鱼各时期都有表达,但在出膜期的时期只有原肠期和出膜后期有明显表达,其他时期表达量极低的,在外源营养期达到最高。结果表明:不同鱼类的调节因子要不同的,昆明裂腹鱼早期发育中具体调节机制需进一步研究。
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