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树突状细胞(dendritic cells,DCs)被认为是目前功能最为强大的抗原递呈细胞,在启动和放大固有免疫和适应性免疫应答方面发挥着关键作用。在发挥免疫学调节功能的整个过程中,DCs都始终遭受来自血流、组织间液和淋巴流等的剪切力(shear stress,SS)作用,而DCs对生理液流SS的应答还不得而知。因此,本研究的目的是探讨生理层流SS对DCs免疫学功能的影响,以期进一步深入理解DCs的生物学功能。方法:外周血单个核细胞来源的单核细胞,经重组人白介素-4(recombinant human interleukin-4,rh IL-4)和重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,rh GM-CSF)诱导获得未成熟DCs(immature dendritic cells,im DCs),再经重组人干扰素-γ(recombinant human interferon,rh IFN-γ)和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导获得成熟DCs(mature dendritic cells,m DCs)。用椎板剪切仪给DCs加载1、5、10、15 dyn/cm2的SS,作用1、3、6、12小时后在光学显微镜下观察DCs形态和检测DCs的细胞骨架F-actin的分布。用FITC标记的右旋糖苷与DCs共孵育,以检测DCs抗原吞噬能力。应用流式细胞术检测DCs的表型CD11c,CD40,CD80,CD83,CD86,CCR7,CD1a,CD205和HLA-DR的表达,流式细胞术检测DCs表面粘附分子CD18,CD11a,CD54,CD62P和CD106表达。用芯片技术检测DCs的micro RNA、m RNA和lnc RNA表达谱,实时荧光定量PCR(Real-time q PCR)验证芯片的结果。结果:加载SS后,DCs的形态发生明显变化,与对照组相比较,剪切力使细胞明显变小、突起减少,细胞直径明显变小(P<0.05),DCs的细胞骨架(F-actin)发生了重组;细胞的抗原吞噬能力下降(P<0.05);DCs的表面分子CD1a,CD11c,CD40,CD80,CD83,CD86,CCR7,CD205和HLA-DR的表达显著下调(P<0.05);DCs的粘附分子CD18,CD11a,CD54,CD62P和CD106表达下调(P<0.05)。而且,加载SS后,im DCs有884 m RNAs表达发生变化(变化倍数>1.5,p<0.05),其中304个上调,580下调;25个micro RNAs表达变化(变化倍数>2,p<0.05),21个上调,4个下调;811个lnc RNAs表达变化(变化倍数>1.5,p<0.05),413个上调,398个下调。m DCs有848个m RNAs表达发生变化(变化倍数>1.5,),其中396个上调,453下调;69个micro RNAs表达变化(变化倍数>2,),32个上调,37个下调;1056lnc RNAs表达变化(变化倍数>1.5),658个上调,398个下调;部分感兴趣的基因被选出做PCR验证,IL-10、FOS、CCR2和TLR2的变化趋势与基因芯片的结果一致,has-mi R-532-3p和has-mi R-665的结果与芯片的变化趋势一致。结论:总之,SS能够调控DCs的形态、改变细胞骨架(F-actin)的结构并抑制DCs的免疫免疫表型,基因表达谱也发生了显著地变化,可以推测SS可能是DCs免疫功能的负调控因子,这些结果支持力学免疫学(mechanoimmunology)或者免疫力学生物学(immuno-mechanobiology)的学术观点,对深入理解DCs的免疫调节功能和提高基于DCs的抗肿瘤疫苗的临床治疗效率来说具有重要意义。?