兔粘液瘤病毒(Rabbit myxoma virus)属于痘病毒科(Poxviridae)野兔痘病毒属(Leporivirusgenus),是一种可引起家兔和野兔高度接触性、致死性传染病,病症特征表现为全身皮下特别是颜面部和天然孔周围皮下发生粘液瘤性肿胀。兔纤维瘤病毒(Rabbit fibroma virus)属于兔痘病毒属(粘液瘤病毒属),病毒粒子为砖形,大约300nm×250nm×200nm,可以引起某些品种家兔和野兔的纤维瘤病,呈地方流行性,尤其可引起新生的欧洲家兔和白尾灰兔严重的全身性疾病,造成大批死亡。目前荧光PCR检测技术的应用已十分广泛,具有污染程度低、准确、灵敏和快速等优点。本文目的是建立一种荧光PCR方法来准确鉴别诊断兔纤维瘤病毒和兔粘液瘤病毒,为两种兔病的检测、防控、进出口贸易及基础研究发挥一定的积极作用。1兔粘液瘤病毒和兔纤维瘤病毒PCR鉴别诊断方法的建立根据GenBank上已发表的兔粘液瘤病毒和兔纤维瘤病毒的基因序列,找到区别两种病毒基因的主要抗原基因,设计并合成3条能特异性鉴别诊断兔粘液瘤病毒和兔纤维瘤病毒的引物,通过对PCR反应体系及条件的优化,建立了两种病毒的鉴别诊断PCR方法,并验证了该方法的特异性、重复性及稳定性。2兔粘液瘤病毒和兔纤维瘤病毒荧光PCR鉴别诊断方法的建立根据GenBank上已发表的兔粘液瘤病毒和兔纤维瘤病毒135R基因序列,设计一套PCR引物和探针,经反应优化,建立用于鉴别诊断两种病毒的荧光PCR方法。用10倍倍比稀释的质粒DNA进行扩增以检测其灵敏度,同时用兔出血症病毒、野兔热病原等进行特异性检测,结果显示建立的荧光PCR方法可用于鉴别诊断兔粘液瘤病毒和兔纤维瘤病毒,其灵敏度为10个拷贝的质粒DNA,与兔出血症病毒、野兔热病原无交叉反应。用建立的荧光PCR方法和常规PCR方法对从山西、山东等地收集的97份病兔样品进行检测。