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目的探讨赖氨大黄酸(RHL)对大鼠胆汁淤积性肝纤维化的抑制作用,进一步阐明其作用的可能分子机制;在体内实验基础上体外培养人肝星形细胞(HSC)株,探讨RHL抑制HSC增殖的可能作用机制;为RHL防治胆汁淤积性肝纤维化的研究提供实验依据。方法1体内试验:(1)随机将42只大鼠分为假手术组、模型组、35 mg·kg-1、70 mg·kg-1RHL治疗组、大黄酸组及赖氨酸组,每组7只,采用胆总管结扎(BDL)手术建立胆汁淤积性肝纤维化大鼠模型。(2)使用全自动生化分析仪检测各组大鼠血清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆汁酸(TBA)、总胆红素(TBIL)水平。(3)HE染色对各组大鼠肝脏组织行病理学检查;Masson三色染色观察各组大鼠肝组织纤维组织含量与分布;使用试剂盒通过酶标仪测定各组大鼠肝组织中羟脯氨酸(Hyp)水平;免疫组织化学染色检测各组大鼠α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达部位。(4)RT-PCR检测各组大鼠肝组织中转化生长因子β1(TGF-β1)和α-SMA m RNA表达水平;Western blotting检测各组大鼠肝组织中TGF-β1和α-SMA蛋白相对表达量。2体外实验:(1)体外培养HSC-LX2细胞,实验分成对照组、50μmol·l-1、100μmol·l-1和150μmol·l-1 RHL用药组。(2)采用CCK-8法检测不同浓度的RHL对HSC-LX2细胞活化和增殖的抑制作用。(3)Western blotting检测用不同浓度的RHL处理48小时后HSC-LX2细胞中TGF-β1和α-SMA蛋白相对表达量。结果1体内试验:(1)与假手术组比较,模型组大鼠肝脏质量与体质量比、血清中AST、ALT、TBA和TBIL水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);肝组织肝小叶结构被破坏,胆管显著增生并伴纤维大量增生;Hyp水平升高,差异有统计学意义(P<0.05),免疫组织化学染色显示α-SMA着色于胞膜和胞浆且表达增多;RT-PCR和Western blotting结果显示模型组大鼠TGF-β1、α-SMA m RNA和蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)与模型组比较,35、70mg·kg-1RHL治疗组和大黄酸组,大鼠肝脏质量与体质量比、血清中AST、ALT、TBA和TBIL水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);肝脏病理组织学检查提示35、70 mg·kg-1RHL治疗组和大黄酸组大鼠肝小叶结构尚完整,胆管增生,纤维组织沉积减少;Hyp水平减低,差异有统计学意义(P<0.05);RT-PCR和Western blotting结果显示35、70 mg·kg-1RHL治疗组和大黄酸组大鼠TGF-β1、α-SMA m RNA和蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)与大黄酸组比较,35、70 mg·kg-1RHL治疗组大鼠肝脏质量与体质量比、血清中AST、ALT、TBA和TBIL水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);肝脏病理组织学检查提示35、70 mg·kg-1RHL治疗组大鼠肝组织中胆管增生减少,纤维沉积减少;Hyp水平减低,差异有统计学意义(P<0.05);RT-PCR和Western blotting结果显示35、70 mg·kg-1RHL治疗组大鼠TGF-β1、α-SMA m RNA和蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。2体外实验:(1)CCK-8结果显示,与细胞对照组比较,50μmol·l-1、100μmol·l-1和150μmol·l-1RHL用药组HSC-LX2细胞的增殖明显被抑制,差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)Western blotting结果显示,与对照组比较,50μmol·l-1、100μmol·l-1、150μmol·l-1 RHL用药组处理HSCLX2细胞48小时后细胞中TGF-β1和α-SMA蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论1 RHL可减轻胆汁淤积性肝纤维化模型大鼠的肝脏损伤,抑制模型大鼠的肝纤维化进程。2 RHL能下调大鼠细胞因子TGF-β1和α-SMA的表达,这种通过下调TGF-β1抑制肝星形细胞增殖的效应可能是RHL抗肝纤维化的机制。3 RHL能抑制LX2细胞的活化和增殖,其抑制作用可能通过下调TGF-β1表达实现。