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目的研制Daxx-C抗体，观察Daxx在人乳头瘤病毒16型（HPV16）阳性宫颈癌组织中的分布，分析Daxx与ATRX在Caski细胞中的定位和共定位，为进一步探讨Daxx在HPV16所致宫颈癌进程中的作用及其机制奠定基础。方法（1）利用PRIMER5.0软件，设计Daxx-C基因片段（626-740氨基酸残基）引物，分别引入酶切位点BamHI与SalI，PCR扩增目的基因。将PCR产物连入载体pMD18-T，构建pMD18-T/DM626-740；然后，将BamHI和SalI酶切产物连入载体pET28a，经酶切鉴定及DNA序列分析后，构建原核表达载体pET28a/DM626-740。（2）将质粒pET28a/DM626-740转化E.coli BL21，IPTG诱导表达，利用Ni琼脂糖凝胶层析柱纯化表达产物，Western-blot检测6His-DM626-740融合蛋白及其纯化物。（3）将6His-DM626-740纯化物以皮下多点注射和腹腔注射方式免疫接种4只8周龄雌性BALB/c小鼠；初次免疫3周后，再免疫1次；以后每1周加强免疫1次，共2次。每次免疫前及末次免疫后7天取血，ELISA测定抗体效价。饱和硫酸铵盐析沉淀法初步纯化抗血清，并用Western blot检测之。（4）收集正常宫颈上皮细胞、HPV16阳性不同级宫颈上皮内瘤变（CIN）和不同期宫颈癌病理标本，利用免疫组化技术检测组织细胞中Daxx的分布与定位。（5）培养Caski细胞，利用间接免疫荧光试验和图像软件，观察Daxx和ATRX在细胞中的分布与定位，分析两者的共定位。结果（1）双酶切和DNA测序结果显示，PCR正确扩增了Daxx-C基因片段DM626-740，并成功连入载体pMD18-T或pET28a，构建了质粒pMD18-T/DM626-740与pET28a/DM626-740。（2） pET28a/DM626-740在E.coli中诱导表达分子量约19kDa目的蛋白6His-DM626-740，且该蛋白能被抗Daxx抗体检出。（3）融合蛋白6His-DM626-740纯化物免疫小鼠后，制备的抗Daxx-C多克隆抗体效价为1:6400。（4）光学显微镜下，在正常宫颈上皮细胞，呈棕黄色的Daxx分布于细胞核；在CINⅠ，Daxx主要分布于核膜，核内有少量分布；在CINⅡ、CINⅢ、原位癌和浸润型宫颈癌中，Daxx密集分布于细胞浆和细胞膜。（5）在Caski细胞，显绿色信号的Daxx主要分布于胞浆，少数分布于胞核且在核膜附近荧光较强，呈区域性聚集；显红色信号的ATRX主要分布于细胞核，少量表达于细胞浆；绿色信号与红色信号融合后出现黄色信号。结论（1）构建的原核表达载体pET28a/DM626-740能在E.coli中表达目的蛋白6His-DM626-740。（2）研制的Daxx-C抗体可用于检测组织细胞中的Daxx。在HPV16所致宫颈癌进程中，Daxx从细胞核内逐渐转位到核膜、胞浆及胞膜；在CINⅡ后，定位到细胞浆与细胞膜。（3）Daxx和ATRX在Caski细胞存在共定位，且主要共定位核膜。