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甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin，MBL)是C型凝集素超级家族中胶凝素家族成员。它可选择性识别多种病原体表面的糖结构，以不依赖抗体和C1q的方式激活补体，发挥溶破和间接调理功能，还能与吞噬细胞胶凝素受体结合而起直接调理作用。已发现3个可引起免疫缺损的MBL结构基因点突变——CGT52TGT、GGC54GAC和GGA57GAA，其编码产物氨基酸均发生改变，可导致血清MBL水平低下。这些等位基因为常染色体共显性遗传，人群中其基因频率高得令人惊奇，最高者竟达0.29，我国汉族GGC54GAC频率约0.1。显然，MBL缺损是迄今所发现的最常见的免疫缺损病。人群中不明原因反复感染的发病率很高，其最可能病因就是MBL基因突变引起的免疫缺损，但发病机理未明。 本实验室近几年的工作主要是MBL缺损，其中一个重要方面就是MBL缺损发病机理的研究，意欲重点阐明2个问题：MBL基因突变如何引起血清MBL水平低下?突变MBL蛋白的功能有否缺陷? 本实验以GGC54GAC MBL突变为研究对象，选用真核表达质粒pCI-neo，根据已构建好的含54位密码子突变型MBL基因T载体的结构，设计合成新的引物，PCR扩增54位密码突变型MBL基因，凝胶回收，双酶切PCR产物和pCI-neo质粒，T4连接酶连接，将前者克隆至后者的Sma Ⅰ和Sal Ⅰ位点，转化大肠杆菌XL-1blue，氨苄选择培养。抽提、鉴定、纯化重组质粒后，脂质体转染法将重组质粒导入中国仓鼠卵巢细胞(CHO-dhfr~-)中，G418选择转染子并克隆化培养，经RT-PCR和分子灯塔探针杂交鉴定其mRNA转录，获得4株稳定表达54位密码突变型MBL的CHO细胞。 本实验另选用了原核表达质粒pET28(b)，根据已构建好的含有MBL野生型基因的T载体pGEM-MBL，设计一对引物，PCR扩增MBL基因，凝胶回收，双酶切PCR产物和pET28(b)质粒，T4连接酶连接，转化大肠杆菌 DHS a，氨芋选择培养挑取克隆鉴定。抽提、鉴定、纯化重组质粒后，CaCI。法导入宿主菌大肠杆菌 BLZI（DE3）中，IPTG诱导，以“SDS．PAGE和 Western blot鉴定，获得原核表达的 MBL蛋白。经亲和层析，0．9％NaCI透析，获得纯化MBL蛋白。 本实验工作属“ MBL缺损发病机理及诊断治疗研究”大课题的部分内容，它为后续研究奠定了基础。