降解玉米赤霉烯酮和黄曲霉毒素B1菌株的筛选、鉴定及评价

来源 :河南农业大学 | 被引量 : 6次 | 上传用户:huangjh9246
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玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)和黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1),是由真菌产生的具有强烈毒的次级代谢产物。饲料及食品中的真菌毒素污染严重威胁着人类和动物的健康,因此,探求安全、高效、无毒副作用的清除真菌毒素污染的方法成为研究热点。本研究旨在从发霉饲料和草食动物粪便中筛选出高效降解ZEN和AFB1的微生物,并探索降解特性、机理以及降解产物的致毒活性。试验一降解ZEN菌株的筛选、鉴定及评价以ZEN为唯一碳源和能源,初筛分离到40株存活菌株,复筛从种兔粪便中筛选到菌株H6,降解率最高,达85.37%。结合形态学、生理生化特性和16S rRNA基因测序分析鉴定菌株H6为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。菌株H6以6%接种量发酵培养后,其发酵液在37℃、180 r/min、72 h时,对1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、15μg/mL和20μg/mL ZEN降解率分别为95.60%,91.38%,93.64%,88.60%和85.80%,其中在12 h和24 h时,对1μg/mL降解率分别为86.69%和89.34%,对20μg/mL的降解率分别为76.67%和84.14%。对于1μg/mL ZEN,在37℃、180 r/min、72 h时,菌株H6上清液和菌悬液的清除率为68.93%和28.70%,而经蛋白酶K、蛋白酶K+SDS和热处理后的上清液几乎无降解活性,80%硫酸铵沉淀的胞外蛋白和聚乙二醇6000浓缩8倍上清的降解率分别为:59.68%和93.80%。ZEN降解产物在MCF-7细胞上的增值率显著降低。LC-MS分析ZEN降解产物分子量为398。以上结果表明从种兔粪便中筛选到的解淀粉芽孢杆菌H6(Bacillus amyloliquefaciens H6)对于120μg/mL ZEN均具有较高的降解活性,发挥降解作用的主要是菌株分泌的胞外酶,浓缩上清液具有较好的降解效果,ZEN被降解成分子量为398的无雌激素作用的物质。试验二降解AFB1菌株的筛选、鉴定及评价以香豆素为唯一碳源和能源,初筛分离到42株存活菌株,复筛从羊粪便中筛选到菌株S1,降解活性最高,降解率达61.36%。结合形态学、生理生化特性和16S rRNA基因测序分析鉴定菌株S1为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。菌株S1以10%接种量发酵培养后,其发酵液在37℃、180 r/min、48 h和72 h时,对1μg/mL AFB1的降解率分别为46.21%和80.26%。菌株S1上清液在72 h内对AFB1(1μg/mL)的降解率为55.86%,而经蛋白酶K、蛋白酶K+SDS和热处理后的上清液降解活性几乎消失。硫酸铵沉淀的胞外蛋白对AFB1(1μg/mL)的降解率为30.21%33.13%,而聚乙二醇6000浓缩8倍上清的降解率为85.65%。菌株S1发酵液与AFB1(200μg/mL)在37℃、180 r/min条件下共培养72 h,AFB1降解率为80.64%。降解后的AFB1在鸡胚肝原代细胞中IL-6、TNF-α和Bax的表达量显著降低(p<0.05)。以上结果表明从羊粪便中筛选到的枯草芽孢杆菌S1(Bacillus subtilis S1)对于AFB1具有较高的降解活性,主要发挥降解作用的是菌株分泌的胞外酶,浓缩上清液具有较好的降解效果,AFB1降解后对鸡胚肝原代细胞的损伤作用减弱。
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