Wee1在大肠肿瘤细胞株中的表达及意义

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目的:检测大肠肿瘤细胞中Wee1及其磷酸化蛋白的表达,选用了Wee1的抑制剂PD407824作用于大肠肿瘤细胞,观察抑制Wee1的作用后对大肠肿瘤细胞增殖的影响,旨在为发现大肠肿瘤基因治疗新的靶点提供理论依据。方法:1、首先采用western blotting的方法筛选出不同大肠肿瘤细胞株(lovo、HCT116、SW620、SW480)中Weel表达较高的细胞株来进行下一步的研究。2、使用血清饥饿法将细胞大致停滞于同一细胞周期后,用western blotting法测定细胞株中Weel总蛋白及p-Wee1Ser53和p-Wee1Ser642的表达。3、将Weel抑制剂PD407824稀释成不同浓度后,采用CCK8测定不同时间细胞株的增殖情况及显微镜下观察细胞株的形态变化。结果:1、在四种不同大肠肿瘤细胞株lovo、HCT116、SW620、SW480中,以HCT116细胞株中的Weel的表达相对较高。2、在不同时间点,Weel及其磷酸化蛋白的表达高低不一样,我们发现它们会在6h、12h、24h表达升高,而Wee1、p-Wee1Ser53和p-Wee1Ser642蛋白表达的增高分别在6h、12h和12h表达最明显。3、抑制Weel的活性可以抑制HCT116细胞增殖。4、电子显微镜下观察使用Weel抑制剂后不同时间点的HCT116细胞株,发现随着浓度的增加细胞数量明显减少,并且细胞变小变圆。结论:1、Weel的磷酸化水平与其活性及降解有密切关系。2、Weel抑制剂对于Weel表达较高的大肠肿瘤细胞株的增殖有抑制作用。3、Weel抑制剂有望作为一个新的选择性的肿瘤治疗手段。
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