第一部分:人胚嗅鞘细胞分离培养目的 建立体外培养纯化人胚嗅鞘细胞的模型,观察不同时期人胚嗅鞘细胞形态学变化。方法 采用无血清培养技术,差速贴壁+免疫吸附的纯化方法,培养并纯化取自3-7月人胚嗅球的嗅鞘细胞。根据免疫组化染色结果统计培养所得嗅鞘细胞纯度。结果 此培养方法可获得大量、高纯度的嗅鞘细胞。结论 本试验成功培养了人胚嗅鞘细胞,为进一步临床移植应用研究提供纯度较高的人胚嗅鞘细胞。第二部分:人胚嗅鞘细胞不同取材及培养方法对纯度的影响目的 通过对多种方法的比较获得较为理想的取材和纯化嗅鞘细胞的措施。方法 应用三种不同的取材方法各获取20份样本,对取材引起的细胞损伤以及同一条件下培养10天后细胞纯度进行对照;在将细胞接种密度统一调整到106/ml后应用三种纯化方法各对20份样本处理并作纯度比较;同样密度和接种数量的原代细胞各取10份种植于3种不同培养皿,对细胞贴壁速度和最终纯度进行检验;对3种常用的细胞接种密度104/ml、105/ml、106/ml统一其它培养条件后作比较。结果 我们从中筛选出最佳取材方法为直接挤压法,其获得的细胞纯度为82.56%,明显高于传统分离法(66.24%)和机械过滤法(61.35%);最好的纯化嗅鞘细胞方法为免疫吸附法,其细胞纯度达到94.66%,而差速贴壁法(81.59%)和化学试剂法(76.45%)均由于损失细胞太多不可取;同时发现包被培养皿对纯化细胞意义重大,P75包被组不仅培养细胞的纯度最高(87.69%),而且还有利于OECS<WP=5>的快速贴壁;高密度接种细胞对提高细胞的最终纯度也是非常有利,3组(接种密度分别为104/ml、105/ml、106/ml)培养10天后的P75阳性细胞率差异巨大,分别为34.61%,49.39%,71.55%。结论 应用最佳取材及培养方法收获大量嗅鞘细胞将对其进一步的基础研究以及将来应用于临床产生深远意义。第三部分:人胚嗅鞘细胞在大鼠颅脑外伤中的作用目的:研究嗅鞘细胞在大鼠颅脑外伤中的作用.方法:将从人胚获得的嗅鞘细胞注射到颅脑外伤的大鼠(n=125)模型中,在1d,4d,1w,2w,4w将大鼠处死作相关分析.用NSS评分法来评价大鼠的神经功能恢复情况,p75 阳性细胞来了解嗅鞘细胞在脑组织中的分布情况.结果:与对照组相比,给予嗅鞘细胞能显著的降低颅脑外伤后引起的神经运动功能障碍.结论:嗅鞘细胞是治疗颅脑外伤的一种有效的治疗方法.