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[目的]通过不同浓度细胞色素C作用于离体的HL-60细胞，探讨其诱导凋亡的可能的分子机制，为把细胞色素C用于白血病的治疗提供理论依据。
[方法]1、用MTT检测不同浓度和时间的细胞色素C对HL-60细胞生长的抑制率。
2、用普通光镜、荧光显微镜检测不同浓度的细胞色素C作用于HL-60细胞后细胞发生的形态变化。
3、用流式细胞仪检测不同浓度的细胞色素C对HL-60细胞促凋亡作用及细胞周期的变化并进行凋亡定量分析。
4、利用DNA凝胶电泳技术观察不同浓度的细胞色素C作用于HL-60细胞其DNA凝胶电泳的变化。
5、采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测不同浓度的细胞色素C作用于HL-60细胞后凋亡相关基因Bcl-2、Fas表达的变化并进行半定量分析。
6、采用westernblotting技术检测不同浓度的细胞色素C作用于HL-60细胞后凋亡相关基因Bcl-2、Fas表达的变化并进行半定量分析
[结果]1、不同浓度的细胞色素C对体外培养的HL-60细胞其抑制作用随着细胞色素C浓度的增加和作用时间的延长，抑制率逐渐增加。MTT结果表明当加入细胞色素C浓度分别是0、9.375mg/L、18.75mg/L、37.5mg/L、75mg/L、150mg/L作用于HL-60细胞24h，其抑制率分别是(0±0.00)％、(7.809±1.495)％、(18.023±1.687)％、(36.917±3.979)％、(65.004±4.496)％和(79.833±4.837)％，细胞色素C在0～150mg/L的范围内对HL-60的抑制率是逐渐升高的。
2、DNA荧光染料Hoechst33342和碘化丙啶(PI)双染HL-60细胞后观察其形态学变化：经上述终浓度处理的细胞用Hoechest33342、PI双染后于荧光显微镜下观察可见处理组细胞出现细胞核明显固缩、凝聚和断裂，并出现凋亡小体，在0～37.5mg/L时，随着细胞色素C浓度的增加，出现凋亡细胞明显增多，在37.5mg/L时凋亡率最高，当细胞色素C浓度大于37.5mg/L时，细胞凋亡率并不增加，而是下降，且出现细胞坏死，而空白对照HL-60细胞核染色质均匀。
3、流式细胞术结果显示：加入细胞色素C浓度分别是0、9.375mg/L、18.75mg/L、37.5mg/L、75mg/L、150mg/L作用于HL-60细胞24h，当细胞色素C浓度在0～37.5mg/L时，细胞凋亡逐渐增加，在37.5mg/L，凋亡率最高；当细胞色素C浓度大于37.5mg/L时，细胞凋亡率反而降低，其凋亡率分别为(0±0)％、(4.52±0.901)％(12.39±1.369)％、(21.98±3.296)％、(15.75±2.005)％、(8.11±2.193)％。
4、细胞色素C诱导HL-60凋亡的作用与细胞周期密切相关，随凋亡的增加，G1期比率随之增加，其二者呈正相关。
5、DNA琼脂糖凝胶电泳图谱显示：当用上述细胞色素C处理的细胞获得的DNA电泳时出现了典型的“梯状条带”。且细胞色素C浓度在0～37.5mg/L时，随细胞色素C浓度增加，条带越明显。
6、RT-PCR技术检测不同浓度的细胞色素C作用于HL-60细胞24小时后其相关凋亡基因Bcl-2、Fas表达随细胞色素C浓度的不同而不同。
7、用westemblotting技术检测不同浓度的细胞色素C作用于HL-60细胞24小时后其相关凋亡蛋白Bcl-2、Fas表达随细胞色素C浓度的不同而不同。
[结论]1、细胞色素C可明显抑制乩-60细胞的生长，并呈时间剂量依赖性。
2、在一定浓度范围内细胞色素C可诱导乩-60细胞凋亡，当超过某一浓度其凋亡并不增加而是导致坏死。
3、细胞色素C诱导HL-60细胞凋亡可能与抑制Bcl-2基因的mRNA与蛋白质的表达促进Fas基因的mRNA与蛋白质的表达有一定的关系。