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第一部分 溴隐亭致大鼠流产模型的改良及大鼠蜕膜细胞凋亡的初步观察 目的:改良溴隐亭致大鼠流产模型,初步观察大鼠蜕膜细胞的凋亡情况。 方法:孕鼠随机分为四组,每组 10 只,于妊娠第 6～8 天每日皮下注射溴隐亭 0.5 mg/kg·d,0.4 mg/kg·d,0.3 mg/kg·d 及 0.2 mg/kg·d,妊娠第 9 天处死大鼠,观察妊娠结局,计算流产率。以致流产率在 70%以上的溴隐亭剂量为最佳建模剂量,重复实验两次,观察流产模型的稳定性。同时取正常与流产大鼠的蜕膜作 TUNEL 染色,观察凋亡情况。 结果:0.5 mg/kg·d,0.4 mg/kg·d,0.3 mg/kg·d 及 0.2 mg/kg·d 剂量溴隐亭的致流产率分别为 100%,80%,50%和 40%。以 0.4mg/kg·d 剂量重复实验两次,流产率均稳定在 80%。TUNEL 染色正常妊娠组和模型组阳性细胞核/总细胞核的比例分别为(12.05±1.95)%和(41.36±2.87)%,P<0.05。 结论:于妊娠第 6～8 天每日皮下注射溴隐亭 0.4mg/kg·d 能建立稳定的 SD大鼠流产模型;正常妊娠大鼠蜕膜细胞存在凋亡,但流产大鼠蜕膜细胞凋亡比例高于正常妊娠大鼠。第二部分 中药治疗溴隐亭致流产大鼠模型对蜕膜细胞凋亡的影响及其作用机制 目的:研究不同孕龄大鼠蜕膜细胞凋亡的规律,溴隐亭诱导大鼠蜕膜细胞凋亡的作用机制和中药保胎治疗对蜕膜细胞凋亡的影响。 方法:按第一部分方法建立大鼠流产模型并随机分为三组:模型组(Bro组,n=10);中药治疗组(H 组,n=10),每日灌服保胎中药;黄体酮治疗组(P组,n=10);另设 10 只正常孕鼠(N 组)作对照。孕 9 天及孕 12 天时处死大鼠,观察流产率,取外周血放免法测 PRL、P 水平,TUNEL 染色检测蜕膜细胞凋亡,RT-PCR 法检测蜕膜 Caspase-8、Caspase-3 mRNA 的表达,荧光法测蜕膜Caspase-3 活性,免疫组化法检测蜕膜 Bcl-2、Bax 蛋白的表达。 结果:中药保胎治疗妊娠成功率为 80%～90%,与 N 组及 P 组无明显差异。从时间上看,各组孕 9 天时蜕膜细胞的凋亡比例高于孕 12 天时(P<0.05),Caspase-8、Caspase-3 mRNA 的表达,Caspase-3 活性及 Bax/Bcl-2 比值均显著高于孕 12 天(P<0.05);相同孕龄不同处理组间比较,Bro 组蜕膜细胞的凋亡比例明显高于 N 组、P 组和 H 组(P<0.05),流产大鼠蜕膜 Caspase-8、Caspase-3mRNA 的表达,Caspase-3 活性及凋亡调节蛋白 Bax/Bcl-2 比值显著高于 N 组、P 组和 H 组(P<0.05);H 组与 N 组及 P 组相比无显著差异(p>0.05)。 1<WP=5>复旦大学临床博士研究生毕业论文 中药对溴隐亭致大鼠流产模型蜕膜细胞凋亡的影响及其作用机制结论:大鼠妊娠第 9 天蜕膜细胞的凋亡比例高于孕 12 天;溴隐亭致流产大鼠蜕膜细胞凋亡过度,中药和黄体酮治疗都能抑制蜕膜细胞的凋亡。