【摘 要】
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【目的】 探讨人中性粒细胞防御素以及细胞外核苷酸诱导呼吸道上皮细胞IL-8表达及其机制;克隆人中性粒细胞防御素基因cDNA,研究其cDNA在气管上皮细胞的表达,以期为呼吸道感染
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【目的】 探讨人中性粒细胞防御素以及细胞外核苷酸诱导呼吸道上皮细胞IL-8表达及其机制;克隆人中性粒细胞防御素基因cDNA,研究其cDNA在气管上皮细胞的表达,以期为呼吸道感染与炎症性疾病天然免疫发病机制的认识及其防治打下基础。 【方法】 Biogel P-10分子筛层析分离中性粒细胞防御素,质谱分析、毛细管电泳鉴定其纯度和分子量,琼脂糖弥散法检测其抗菌活性。乳酸脱氢酶释放实验分析试剂对A549细胞毒作用。LiquiChip分析仪测定10种炎症反应相关细胞因子的水平。ELISA法测定A549刺激实验和刺激抑制实验的细胞培养上清IL-8浓度。RT-PCR方法检测A549细胞P2Y受体mRNA表达。反义寡核苷酸技术进行P2Y受体阻断实验,生物发光法分析培养上清ATP含量。同位素125I和荧光素FITC标记,进行中性粒细胞防御素与A549细胞的结合实验分析。增强型绿色荧光蛋白IL-8报告基因检测ATP刺激后A549细胞报告基因表达。脂质体法转染重组表达质粒pBabe-Neo- HNP1于培养的人气管上皮细胞,RT-PCR检测转染细胞HNP1mRNA表达。免疫组化法检测转染气管上
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