相同基因型大白菜基于不同倍性水平的生物学性状及基因表达研究

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以本实验室特有的大白菜“85-1”单倍体为试材,通过秋水仙素对其进行诱导,经细胞学鉴定、DNA流式细胞仪鉴定获得了相同基因型二倍体、四倍体大白菜植株。对相同基因型大白菜单倍体、二倍体、四倍体进行了植株特征特性调查、细胞形态学观测等,比较了相同基因型不同倍性大白菜在生物学特性方面的差异;同时利用实时荧光PCR技术开展了对控制大白菜器官大小的ARGOS基因、与同源染色体联会相关的ASY1基因在单倍体、二倍体、非整倍体和四倍体植株间基因表达水平的研究,进而分析了不同倍性大白菜特性与相关基因表达的关系。主要研究结果如下:1.浓度0.2%秋水仙素处理大白菜单倍体组培苗48h得到二倍体的诱导率为13.72%,且处理后植株长势良好。选用此处理浓度和时间对单倍体大白菜“85-1”进行诱导,获得了相同基因型的单倍体、二倍体、四倍体植株。2.以来自于同一单倍体的二倍体大白菜为母本与四倍体大白菜杂交,取授粉后8d的子房在改良White中进行离体培养获得了成活胚珠。将成活的胚珠接于1/2MS培养基上培养,30d后得到再生植株,根尖染色体计数结果表明,获得的植株为非整倍体大白菜(2n=24)。3.相同基因型的单倍体、二倍体、非整倍体和四倍体大白菜在植株性状、细胞学形态方面均表现出差异。随着染色体数目的增加,单倍体、二倍体、非整倍体、四倍体叶片呈增加的趋势。与单倍体植株花器官相比,二倍体、四倍体以及非整倍体植株花蕾和花瓣明显增大,花瓣形状为倒卵形;单倍体花药较小、有少量或无花粉,二倍体、四倍体花药正常、且均有花粉。4.利用实时荧光PCR对相同基因型的单倍体、二倍体、非整倍体和四倍体大白菜叶片、花蕾中的的ARGOS基因进行基因表达差异的研究,结果表明:在叶片和花蕾中ARGOS基因的表达量,均随着倍性的增加呈非线性增加的趋势,与不同倍性大白菜叶片、花器官大小变化趋势一致。相对于二倍体大白菜叶片ARGOS基因表达而言,单倍体叶片ARGOS基因表达量最低,仅为二倍体表达量的0.451倍;四倍体叶片ARGOS基因表达量最高,为二倍体表达量的2.144倍;而非整倍体(2n=24)的表达量是二倍体的1.580倍。相对于二倍体大白菜花蕾ARGOS基因表达而言,单倍体花蕾ARGOS基因表达量仅为二倍体表达量的0.233;四倍体花蕾ARGOS基因表达量最高,为二倍体表达量的2.457倍;而非整倍体(2n=24)的表达量高于二倍体,为二倍体的1.812倍。5.利用实时荧光PCR对相同基因型的单倍体、二倍体、非整倍体和四倍体大白菜的ASY1基因进行基因表达差异的研究,结果表明:ASY1基因在大白菜叶片中不表达;同一时期,不同倍性大白菜花蕾中,二倍体ASY1基因的表达量最高,四倍体次之,单倍体和非整倍体较低。同一材料,花蕾减数分裂期前和成熟花粉粒期,ASY1基因表达量较减数分裂期明显下降,且减数分裂期前和成熟花粉粒期ASY1基因的表达量接近。
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