乙型肝炎是危害人类健康的主要传染性疾病之一，疫苗接种是防治该病毒传染的主要途径。通过基因工程表达的乙肝表面抗原已经得到广泛的应用，但是下游分离纯化工艺不尽完善，主要表现为总HBsAg收率较低(＜20％)，成本较高，仍有较大改进余地。本文就提高分离纯化乙肝表面抗原活性收率为目的，开发了新的工艺路线，成功地提高了中国仓鼠卵巢细胞(CHO)表达的乙肝表面抗原的回收率，降低了生产成本。研究工作主要包括以下内容： (1)首先考察了动物细胞表达的重组乙肝表面抗原在不同pH、硫酸铵浓度以及羟基化合物(例如蔗糖、聚乙二醇)溶液环境中的稳定性，结果表明，乙肝表面抗原在中性(pH7.0)比较稳定，酸性或碱性条件下(pH4.0、6.0、8.0)乙肝表面抗原活性不稳定，温度、硫酸铵以及羟基化合物对乙肝表面抗原稳定性的影响不大； (2)研究了硫酸铵沉淀与疏水层析相结合的粗分离细胞培养上清液的工艺，在HBsAg回收率稳定不变的情况下，使粗分离纯化倍数由原来的不足80提高到100-120，同时延长了疏水层析介质的使用寿命； (3)针对超大生物分子蛋白颗粒在离子交换层析介质上吸附解吸过程因亚基解离而导致生物活性降低或丧失的难题，研究了用亲水性多羟基化合物聚乙二醇(PEG)沉淀疏水层析后样品，并与超滤方法结合取代离子交换层析分离纯化HBsAg，探讨了PEG沉淀乙肝表面抗原的机理，结果表明，0.12g/mL的PEG-A在4℃、pH9.0等条件下沉淀乙肝表面抗原，有效地去除了生物大分子杂质和牛血清白蛋白(BSA)，纯化倍数3.7，回收率96.8％，并且在PEG伴随式的超滤和凝胶过滤中，减少了膜的污染和提高凝胶过滤的分离度。 (4)对于重组酵母表达的胞内分泌型乙肝表面抗原的分离体系，建立了以离子交换、疏水和凝胶过滤层析分离技术为主的操作简单、易放大的工艺路线，有效去除了细胞破碎液中的脂类、细胞器、细胞宿主蛋白等，整个工艺最终回收率达到30％以上，高于目前文献报道的10-15％的回收率。并首次尝试用自行研制的低配基密度疏水层析介质取代进口介质，取得了良好的分离效果和降低介质的成本。