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目的创伤性脑损伤(traumatic brain injury ,TBI)病灶的发生和进展与脑挫伤周围组织发生的延迟神经元死亡有密切关系。近年的研究证实,细胞凋亡(apoptosis)在TBI的延迟性细胞死亡中起重要作用。本实验参照Feeney等的自由落体硬膜外撞击法,经改良后制作大鼠脑挫伤动物模型,应用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(Terminal deoxynucleotidyl Transferase Biotin-dUTP Nick End Labeling,TUNEL)以及免疫组织化学方法(SABC法),检测高压氧(HBO)和亚低温(MHT)治疗对损伤脑组织中的细胞凋亡状态及Bcl-2蛋白表达水平,从分子生物学水平探讨细胞凋亡与脑损伤组织中延迟性细胞死亡的关系,探讨高压氧及亚低温治疗对TBI的脑保护作用,为临床颅脑外伤的治疗提供实验依据。材料与方法实验采用40只成年wistar大鼠,参照Feeney等的自由落体硬膜外撞击法,经改良后制作大鼠脑挫伤动物模型,随机分为四组:TBI组、TBI+HBO组、TBI+MHT组和TBI+HBO+MHT组。应用原位末端标记法(TUNEL)和流式细胞术对各组动物脑挫伤灶旁的细胞凋亡情况进行检测;使用免疫组化方法检测Bcl-2蛋白在脑组织中的表达水平。结果HE常规染色切片中可见挫伤坏死灶,灶内有大量细胞核碎片聚集,灶周内大量有核细胞密集,核大小较均一,其间杂有染色质浓缩边集及突出细胞的凋亡小体。TUNEL阳性染色细胞主要表现为细胞核呈黄绿色荧光,在各组切片中,阳性细胞均主要分布于灶周4mm范围内,余部及对侧脑组织几乎无阳性细胞发现。流式细胞术定量检测各组细胞凋亡率显示,经高压氧与亚低温治疗后,细胞凋亡率明显降低,均有统计学意义。Bcl-2阳性染色细胞主要表现为细胞核呈棕黄色,TBI+HBO组、TBI+MHT组和TBI+HBO+MHT组Bcl-2的表达均高于TBI组(P<0.05),其中TBI+HBO+MHT组Bcl-2表达最高,这些数据与经高压氧及亚低温治疗后细胞凋亡数的减少相一致。结论1、细胞凋亡机制在TBI延迟细胞死亡中起重要作用,细胞凋亡参与TBI的病理过程,增加细胞死亡数量及范围。2、高压氧和亚低温治疗能明显减少脑挫伤组织的细胞凋亡数量及范围,并能通过增加Bcl-2蛋白表达水平抑制正常细胞凋亡,减少延迟性神经细胞死亡。3、实验结果表明高压氧和亚低温治疗对创伤性脑组织均有神经保护作用,二者联合应用效果更明显。