多糖是由单糖通过糖苷键连接形成的,聚合度超过20的高分子碳水化合物,具有免疫调节、抗肿瘤和菌群调节等生物活性,其活性与结构密切相关。海洋软体动物中硫酸化多糖由于硫酸基团修饰,近年来大量研究报道了其显示出独特的抗凝血、抗动脉粥样硬化等生物活性。然而,该类多糖的高效分离纯化方法和结构解析策略的缺失仍大大限制了其进一步应用。以海洋软体动物为例,其结构分析主要面临三大难题:（1）蛋白含量高,提取纯化难,步骤繁琐;（2）复杂多糖降解难,特定酶系缺乏,酸降解易导致支链和硫酸基脱落;（3）结构解析难,核磁响应低,传统中性糖甲基化方法难以适用高度杂化和硫酸化的海洋多糖。基于此,本研究以9种大宗典型海洋软体动物多糖为对象,突破其高效分离提取及纯化方法,建立了基于非金属Fenton氧化降解-亲水色谱质谱联用（HILIC-MS-MS）联合生物信息学软件的复杂糖链解析策略,在典型GAGs上初步证明了策略的可行性;将该策略应用于水泡蛾螺、翡翠贻贝和虾夷扇贝多糖结构解析,初步推断其片段结构,具体如下:（1）海洋软体动物硫酸化多糖提取和快速分离纯化方法构建以9种海洋软体动物为研究对象,使用复合酶解技术初步脱蛋白得到硫酸化粗多糖,再采用强阴离子交换层析柱基于多糖所带电荷不同分离纯化得到硫酸化纯多糖。理化性质分析结果表明,样品硫酸化纯多糖中蛋白质含量从7%降至5%;纯化多糖峰为单一组分且分子量明显下降;除厚壳贻贝和紫贻贝外,纯化多糖的葡萄糖含量下降20%左右,糖醛酸和氨基糖含量增加15%左右。以上结果表明复合酶解提取可以初步脱除样品中的大量蛋白,分离纯化操作有效降低了样品中的葡聚糖含量,提高了GAGs或结构类似的硫酸化多糖的含量,证明了该提取及分离纯化方法的可行性。（2）基于非金属Fenton体系的氧化降解及寡糖结构解析方法建立以四种典型糖胺聚糖（GAGs）为对象,建立基于非金属Fenton的氧化降解方法,并优化了降解体系。结果表明,在一定范围内氧化降解效率与反应时间、H2O2和抗坏血酸浓度成正比,最佳反应条件:200 mmol/L H2O2-10 mmol/L抗坏血酸,反应温度100℃,反应时间8 h。进一步的寡糖HILIC-MS-MS结合Glycosoft 2.0生物信息学软件分析表明,所产生的寡糖碎片主要以聚合度2～5为主,且均能在HILIC色谱上较好得到较好分离和鉴定,所产生的寡糖序列结构和已经报道的三种GAGs的分子结构一致,其基本糖组成及修饰基团位置均得到了保持;而主要寡糖碎片的二级质谱进一步明确了一级结构推测的准确性。上述方法弥补了传统酶解对特异性酶需求高的缺陷,而对比酸降解方法具有能够基本保留糖链结构特征等优势。（3）非金属Fenton氧化降解体系在海洋软体动物硫酸化寡糖结构分析中的应用以三种典型软体动物多糖（水泡蛾螺、虾夷扇贝、翡翠贻贝）为对象,应用上述技术体系研究糖链的精细结构,结果表明:非金属Fenton体系能够有效快速氧化降解三种样品多糖,但是水泡蛾螺未能完全有效降解:使用HILIC-MS-MS结合Glyc Re Soft 2.0分析表明,三种样品多糖降解产物聚合度为2～5,样品中的同分异构寡糖可以在HILIC色谱柱上有效分离;使用生物信息学软件Glyc Re Soft 2.0分析结合二级质谱进一步解析寡糖结构,结果表明三种多糖分子中均含有典型GAG结构组成单元和非典型GAG结构组成单元,其中水泡蛾螺和翡翠贻贝主要产生以中性糖Fuc、Glc、Gal杂多糖组成非典型性GAG寡糖碎片及糖醛酸和氨基糖交替连接构成的典型GAG寡糖碎片,虾夷扇贝则含有Glc、Gal为主的非典型性GAG寡糖碎片及其衍生糖醛酸和氨基糖交替连接构成的寡糖碎片,初步明确了三种糖链主体分子的结构特征。