【摘 要】
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目的:通过水提法对林蛙皮多糖的提取进行工艺优化,利用层析柱对林蛙皮多糖进行分离纯化,采用IR、HPLC、NMR对林蛙皮多糖进行结构分析,考察林蛙皮多糖抗衰老活性,为林蛙皮的开发利用提供实验依据。方法:（1）以林蛙皮为原料,经热水提取,利用单因素考察法,和正交试验优化,确定多糖提取的最佳工艺条件,测得多糖得率。（2）经提取、醇沉获得粗多糖DGP,通过sevage法去除游离蛋白获得组分DGPⅠ,通过酶
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目的:通过水提法对林蛙皮多糖的提取进行工艺优化,利用层析柱对林蛙皮多糖进行分离纯化,采用IR、HPLC、NMR对林蛙皮多糖进行结构分析,考察林蛙皮多糖抗衰老活性,为林蛙皮的开发利用提供实验依据。方法:（1）以林蛙皮为原料,经热水提取,利用单因素考察法,和正交试验优化,确定多糖提取的最佳工艺条件,测得多糖得率。（2）经提取、醇沉获得粗多糖DGP,通过sevage法去除游离蛋白获得组分DGPⅠ,通过酶解联合sevage法去除结合蛋白及游离蛋白获得更高纯度的多糖组分DGPⅡ,所获组分再经凝胶色谱分离获得DGPⅠa和DGPⅡa;采用高效凝胶渗透色谱法验证其纯度,经β-消除反应判断糖肽键的类型,通过HPLC、IR、NMR对DGPⅠa和DGPⅡa的单糖组成、特殊基团等结构特点进行初步分析。（3）利用腹腔注射D-半乳糖构建衰老模型;观察各组小鼠体质量变化情况;利用Morris水迷宫测试检测各组小鼠学习和记忆能力,HE染色检测各组小鼠脑组织病理形态变化,测定小鼠肝脏、血清组织SOD、T-AOC、CAT、GSH-PX活力以及MDA的含量,探讨林蛙皮多糖对衰老小鼠的影响。结果:（1）确定最佳工艺条件为提取温度100℃,提取时间3小时,料液比为1:40,此时多糖得率为1.9782%;（2）经β消除反应判断其林蛙皮多糖DGPⅠa为O-糖肽键类型;单糖组成分析表明DGPⅠa和DGPⅡa均由Man、Glc A、Gal N、Gal、Glc、Fuc组成;IR结果表明DGPⅠa和DGPⅡa具有糖胺聚糖特征基团,且糖苷键类型均是吡喃型;对DGPⅡa进行NMR分析,确定其具有糖胺聚糖特征,结果与IR一致。（3）体内实验表明,与正常组相比,模型组海马区病理性损伤;而在100～400 mg/Kg剂量范围内,对衰老小鼠均能不同程度的改善其体重的下降;改善空间学习和记忆能力;并修复衰老小鼠海马区病理性损伤;且呈剂量依赖性。结论:通过单因素考察法、正交试验分析确定最佳提取条件,并通过IR、HPLC、NMR技术的初步判断林蛙皮多糖DGPⅡa为糖胺聚糖,通过小鼠体内抗衰老活性检测,确定林蛙皮多糖能够改善D-半乳糖诱导的衰老表征,为抗衰老药物的研发提供了新的实验依据
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