大肠杆菌是医学和兽医临床上最常见的病原菌之一,给人类的健康和畜牧业的发展造成了严重的损害。致病性大肠杆菌是人类和动物临床上最常见的病原菌之一,是威胁人类和动物健康的重要致病菌,也是近年来食品卫生、给水卫生及流行病学领域最重要的研究对象之一。20世纪是抗感染药业业绩辉煌的100年,抗生素的发现是人类医学领域最重要的突破之一。抗菌药在控制大肠杆菌感染方面发挥了重要作用,但随着抗菌药物的广泛应用,导致大肠杆菌耐药株尤其是多重耐药菌株不断出现,大肠杆菌的耐药问题已成为影响人类健康和养殖业发展的重要因素。本实验室采用WHO推荐的kirby-Bauer法,以大肠杆菌ATCC25922为质控菌株做对照,对重庆多个地区分离的猪致病性大肠杆菌作耐药性检测,测定它们对26种抗菌药物的耐药性,发现多重耐药菌株为100%,耐药水平大幅提高,所有分离菌株无单一耐药菌株,均耐12种药物以上,多重耐药的菌株集中在耐18种药物到耐22种药物之间,可见受试大肠杆菌对抗生素的耐药十分严重。本实验室前期研究中,在检测Ⅰ型整合酶基因intl1时发现DJ26、CS6、HC16、HC20四株菌株不仅在900bp位置出现了目的条带(S2)外,在460bp左右处还出现另外一条特异性条带(S1)。为了进一步了解这4株菌株的整合酶基因intI1(S2)以及多出的特异性基因(S1)与细菌耐药性和多重耐药性之间的关系,本实验通过分子生物学的方法,将这4株菌株的整合酶基因intI1(S2)以及多出的特异性条带(S1)进行克隆、序列测定与分析、重组表达以及重组菌株(CZ21)的耐药性检测,深入分析其对细菌耐药性的影响。我们将测序结果分别与GenBank所发表的序列进行比较发现,S2序列与大肠杆菌整合酶基因intI1同源性为99%,在14、21、453、836、841、894处发生碱基缺失,缺失碱基分别为A、A、A、C、A、C;S1序列与大肠杆菌整合酶基因intI1同源性亦为99%,在12、19、449处发生碱基缺失,缺失碱基分别为A、A、A。并且序列S1与序列S2的3bp～460bp的同源性为100%。本实验通过分子生物学方法将序列S2(整合酶基因intI1)重组到宿主表达菌BL21和大肠杆菌HC21内,分别得到重组菌株BL21B和CZ21,对重组菌株BL21B和CZ21采用WHO推荐的kirby-Bauer法对先锋V、庆大霉素、丁胺卡那、氟哌酸、青霉素、痢特灵等26种抗生素进行耐药性检测,并同时对BL21和HC21进行相应的耐药性检测作对照。药敏实验结果显示,BL21B和BL21对这26种抗生素都敏感;而重组菌株CZ21对庆大霉素、丁胺卡那、氟哌酸、青霉素等20种抗生素仍然有抗性,同比,大肠杆菌HC21的药敏结果与之基本一致,重组前后大肠杆菌菌株HC21耐药性并未发生明显变化。可见,不管细菌的整合酶基因intI1完整与否,对大肠杆菌的耐药性和多重耐药性都无明显影响。本实验虽然不能直接揭露细菌整合酶基因intI1的完整性与细菌耐药性和多重耐药性之间的联系,但是,本研究为进一步研究细菌整合子捕获和传播耐药基因提出了新的思路和研究方向。