[目 的]研究芹菜素对体外原代培养的人良性胆管瘢痕成纤维细胞(Human benign bile duct scar fibroblasts,HBBDSF)的增殖、凋亡、细胞周期和迁移的影响,以及观察对细胞中的TGF-β1、α-SMA、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ蛋白的表达水平的影响,探究芹菜素在治疗良性胆管狭窄中的应用前景和可能的作用机制。[方 法]体外原代培养HBBDSF并鉴定,选用第4代细胞随机分为实验组和对照组,用CCK-8法检测不同浓度的芹菜素(80μmol/L、40μmol/L、20μmol/L、10μmol/L、5μmol/L)的OD值并计算半抑制浓度(IC50)值,使用IC50值以下浓度的芹菜素进行后续实验。使用CCK-8法和EDU-488法通过间接和直接观察检测芹菜素对细胞增殖的影响;使用细胞划痕和Transwell(迁移实验)检测芹菜素对细胞迁移能力的影响;使用Annexin V和PI双标法标记细胞,使用流式细胞仪检测芹菜素诱导细胞凋亡发生的情况;使用PI单标法标记细胞,使用流式细胞仪检测芹菜素影响细胞的细胞周期的情况;使用细胞免疫荧光和Western Bolt技术检测经芹菜素干预后细胞中TGF-β1、α-SMA、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ蛋白的表达情况。所有研究数据采用SPSS 21.0进行统计分析。[结 果]原代培养细胞呈对数生长,细胞呈单核梭形状,形态类似于成纤维细胞,且形态单一生长旺盛。采用波形蛋白(Vimentin)和角蛋白(Keratin),待测细胞为强阳性表达(表现为绿色荧光),证明此细胞为HBBDSF。CCK-8法显示选取48h的OD值数据计算得出的结果作为芹菜素的IC50值,IC50=22.75μmol/L,R2=0.797。在24h、48h和72h观察时间点内,与对照组相比,芹菜素处理组对HBBDSF的增殖能力有明显抑制作用(P<0.05),且具有浓度依赖性。EDU-488法显示与对照组相比,芹菜素处理组对HBBDSF的增殖能力有明显抑制作用(P<0.05),且具有浓度依赖性。细胞划痕和Transwell(迁移实验)均显示与对照组相比,芹菜素处理组对HBBDSF的迁移能力有明显抑制作用(P<0.05),且具有浓度依赖性。Annexin V和PI双标法检测芹菜素诱导细胞凋亡的能力显示与对照组相比,芹菜素处理组对HBBDSF的凋亡发生有明显促进作用(P<0.05),且具有浓度依赖性。PI单标法检测芹菜素对细胞的细胞周期的影响显示与对照组相比,芹菜素处理组能明显抑制HBBDSF的G1/S期(P<0.05),且具有浓度依赖性。细胞免疫荧光和Western Bolt技术检测经芹菜素干预后细胞中TGF-β1、α-SMA、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ蛋白的表达情况,发现与对照组相比均有明显的抑制作用(P<0.05),且具有浓度依赖性。[结 论]1.成功建立人良性胆管瘢痕成纤维细胞的实验模型;2.芹菜素可通过阻断HBBDSF G1/S期来抑制其增殖;3.芹菜素可通过抑制TGF-β1途径来抑制HBBDSF的迁移能力;4.芹菜素可诱导HBBDSF凋亡的发牛;5.芹菜素干预HBBDSF 后,细胞中的TGF-β1、α-SMA、Collagen Ⅰ和 Collagen Ⅲ蛋白的表达水平明显降低。