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目的:本课题旨在探究三种单体化合物滨蒿内酯（Scoparone,SA）、东莨菪内酯（Scopoletin,SO）和异东莨菪内酯（Isoscopoletin,ISO）对HepG2和HL7702中CYP1A2、CYP2C9和CYP3A4是否具有诱导作用,并分析香豆素与各亚型酶诱导作用的构效关系。方法:1.培养人肝癌细胞系HepG2和人正常肝细胞系HL7702。2.采用MTT比色法测定不同浓度的SA、SO和ISO作用24、36和48h后对HepG2和HL7702细胞增殖的影响,计算IC5 0,筛选有效浓度。3.通过实时荧光定量PCR技术测定SA、SO和ISO处理24、36和48h后对HepG2和HL7702细胞中CYP1A2、CYP2C9和CYP3A4 mRNA表达的影响。4.使用Western blotting法检测SA、SO和ISO处理24或48h后对HepG2和HL7702细胞中CYP1A2、CYP2C9和CYP3A4蛋白表达的影响。结果:1.与正常组比较,不同浓度的SA、SO和ISO作用24、36和48h后,明显抑制HepG2细胞生长,与作用时间和药物浓度均呈正相关,其中SO抑制HepG2细胞生长能力最强;相同条件下三种化合物浓度低于1mM时对HL7702的生长无明显抑制作用,其中SO对HL7702生长的抑制能力最弱。2.与正常对照组比较,Q-PCR实验中,25和50μM的SA、SO和ISO作用24、36和48h后能够明显诱导HepG2和HL7702细胞中CYP1A2、CYP2C9和CYP3A4 mRNA表达,且对HL7702中亚型酶的诱导作用更强。其中,三者对两细胞系中CYP1A2和CYP2C9 mRNA表达随作用时间延长,诱导作用降低;对CYP3A4 mRNA表达的诱导作用随作用时间延长而增加;上述现象均在25μM表现更为明显。3.与正常对照组比较,western blotting实验中,25和50μM的SA、SO和ISO作用24h后能够明显诱导HepG2和HL7702细胞中CYP1A2和CYP2C9蛋白表达,作用48h后显著增加两细胞系中CYP3A4蛋白表达。其中SA和SO对HL7702中CYP1A2蛋白表达的增加作用强于HepG2中该蛋白的表达;三种药物对CYP2C9蛋白的表达在HepG2和HL7702间均无显著差异,各药物之间也无显著差异;而SO作用48h后对HepG2中CYP3A4蛋白水平的上调作用显著强于SA和ISO。结论:1.SA、SO和ISO具有明显的抗HepG2细胞增殖的作用,相比之下对正常肝细胞HL7702细胞增殖的抑制作用较弱。其中24h SA对HepG2细胞生长的抑制能力最强,48h SO对HepG2细胞生长的抑制能力最强,相同浓度下,SO对HepG2的毒性最强。2.SA、SO和ISO在25μM作用24h明显诱导HepG2和HL7702细胞中CYP1A2和CYP2C9 mRNA表达,作用48h显著增加两细胞系中CYP3A4 mRNA表达,且SO的酶诱导能力均较强,其同分异构体ISO的酶诱导能力相对较弱。3.SA、SO和ISO在25μM时明显诱导HepG2和HL7702细胞中CYP1A2、CYP2C9和CYP3A4蛋白表达。48h SO对两细胞中CYP3A4蛋白表达的诱导作用最显著。