论文部分内容阅读
微生物多糖是由细菌、真菌和藻类产生的多糖,以胞壁多糖、胞内多糖和胞外多糖3种形式存在。胞外多糖由于具有易于分离、可连续发酵、不受季节、地域和病虫害的限制等优点,日益受到学者们的重视。酵母多糖是微生物胞外多糖的一种,研究发现其具有多种生理活性,能够提高机体免疫力,还具有抗氧化、抗病毒和抑制肿瘤等作用。本文的主要研究内容和成果如下：(1)从自然界筛选到3株胞外多糖产量较高的酵母菌株,通过5.8S rDNA序列测定及系统发育分析对这3株酵母进行了鉴定,结果表明：从左优红葡萄中分离得到的Z14和Z20与东方伊萨酵母(Issatchenkia orientalis)处于同一分支,相似性达到99%以上；从落叶松附近表层土壤分离得到的L25与土生隐球酵母(Cryptococcus humicolus)处于同一分支,相似性为98.8%。(2)为提高胞外多糖产量,对东方伊萨酵母Z20的发酵工艺条件进行了研究,Z20产胞外多糖的最优发酵培养基配方为：葡萄糖8%,(NH4)2SO40.2%, KH2PO40.1%,酵母浸粉0.1%,CaCl2 0.01%,在此培养基下,胞外多糖产量为2.046 mg/mL,比原始菌株的产量1.137 mg/mL提高80%。Z20产胞外多糖的最佳发酵条件为：初始pH为6.0,摇床转数为180 r/min,装液量为50 mL/250 mL,发酵温度为30℃,接种量为2%,发酵时间为6 d,在此条件下,胞外多糖产量可达到2.327 mg/mL,产量提高了104%。(3)菌株Z20的胞外多糖经DEAE-Cellulose52层析初步分离纯化得到单一的纯化多糖组分EPS-Ⅰ。利用傅立叶红外光谱对EPS-Ⅰ进行分析,发现EPS-Ⅰ具有-OH、-CH、-C=O等典型的多糖特征官能团；利用气相色谱对EPS-Ⅰ的水解产物进行分析,结果表明：EPS-Ⅰ的水解产物由甘露糖、木糖和鼠李糖三种单糖组成,组成比例分别为84.91%、11.47%和3.62%。(4)对菌株Z20胞外多糖的体外抗氧化和体外抑菌活性进行了初步研究。以胞外多糖的总抗氧化能力和对DPPH·、羟基自由基、超氧阴离子的清除率四个方面来考察EPS-Ⅰ的体外抗氧化能力,结果验证了EPS-Ⅰ具有抗氧化活性,当EPS-Ⅰ浓度为20mg/mL时,对DPPH·和超氧阴离子的清除率均达到80%以上。用滤纸片法测定了EPS-Ⅰ饱和溶液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣、青霉和黑曲霉的抑制作用,试验证明EPS-Ⅰ对以上菌种的生长繁殖均无明显抑制作用。