目的:探讨1,25-二羟基维生素D₃（1,25-dihydroxyvitamin D₃,1,25-（OH）₂D₃）在糖尿病（Diabetes mellitus,DM）防治中的作用。1,25-（OH）₂D₃通过改善内质网应激（Endoplasmic reticulum stress,ERs）抑制过氧化氢（Hydrogen peroxide,H₂O₂）诱导的凋亡相关分子表达,从而减少MIN6细胞凋亡,为将1,25-（OH）₂D₃应用于1型糖尿病（Type1 diabetes mellitus,T1DM）的防治提供实验依据。方法:以小鼠胰岛瘤MIN6细胞为研究对象。不同浓度1,25-（OH）₂D₃预处理后,H₂O₂刺激MIN6细胞,CCK8检测MIN6细胞活力,筛选出1,25-（OH）₂D₃的最佳作用浓度及时间;倒置显微镜观察细胞形态;Hoechst 33258染色荧光显微镜观察细胞核形态;TUNEL检测凋亡细胞（绿色荧光）;流式细胞术检测MIN6细胞凋亡百分率;Western blot检测VDR、ERs通路分子（GRP78、PERK、Phospho-PERK、ATF4、CHOP）以及凋亡相关分子（Bcl-2、Bax、MCL-1、Caspase-9、Cleaved caspase-9、Caspase-3、Cleaved caspase-3）表达;GSK2606414是一种高效、选择性的PERK抑制剂,加入GSK2606414后,Western Blot检测Phospho-PERK、ATF4蛋白水平,CCK8检测MIN6细胞活力变化。结果:（1）CCK8结果显示,1,25-（OH）₂D₃的最佳作用浓度为5nmol/L,作用时间为3 h。与H₂O₂组相比,1,25-（OH）₂D₃预处理能显著提高MIN6细胞活力（P<0.05）;（2）Hoechst 33258染色观察细胞核形态,1,25-（OH）₂D₃预处理组染色质固缩、呈致密浓染的细胞数目显著减少。1,25-（OH）₂D₃预处理组TUNEL染色阳性细胞数目明显降低,表明1,25-（OH）₂D₃可减少H₂O₂诱导的MIN6细胞凋亡;（3）流式细胞术检测MIN6细胞凋亡百分率,1,25-（OH）₂D₃预处理组凋亡百分率（9.32%）显著低于H₂O₂组凋亡百分率（28.2%）（P<0.05）,进一步证实1,25-（OH）₂D₃可减少由H₂O₂诱导的MIN6细胞凋亡;（4）Western Blot结果显示,与H₂O₂组比,1,25-（OH）₂D₃预处理组VDR表达显著增加（P<0.05）;GRP78、Phospho-PERK、ATF4、CHOP蛋白表达下调（P<0.05）,PERK蛋白表达无显著改变;Bcl-2、MCL-1蛋白表达均增加（P<0.05）,Bax蛋白表达降低（P<0.05）,Cleaved caspase-9、Cleaved caspase-3片段含量降低（P<0.05）,Caspase-3表达无显著改变。说明1,25-（OH）₂D₃能减少由H₂O₂诱导的ERs通路蛋白表达、增加抗凋亡Bcl-2、MCL-1蛋白表达,减少促凋亡Bax蛋白表达及Cleaved caspase-9、Cleaved caspase-3含量;（5）加入GSK2606414后,Western Blot结果显示,1,25-（OH）₂D₃+H₂O₂组、GSK2606414+H₂O₂组、GSK2606414+1,25-（OH）₂D₃+H₂O₂组,Phospho-PERK、ATF4蛋白表达均降低（P<0.05）。说明1,25-（OH）₂D₃与GSK2606414具协同作用,共同抑制了H₂O₂诱导的Phospho-PERK、ATF4蛋白表达,增加MIN6细胞活力（P<0.05）。结论:（1）1,25-（OH）₂D₃通过抑制PERK-ATF4-CHOP信号通路,改善了ERs;（2）1,25-（OH）₂D₃通过增加抗凋亡蛋白Bcl-2、MCL-1表达,降低促凋亡蛋白Bax表达及Cleaved caspase-9、Cleaved caspase-3含量,抑制H₂O₂诱导的MIN6细胞凋亡。