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目的:1.通过建立非酒精性脂肪肝(NAFLD)体内外模型,探讨内质网应激(ERS)对NAFLD的影响及机制。2.以雷公藤红素干预NAFLD细胞模型,探讨雷公藤红素对NAFLD的防治作用,以及对其ERS的影响及可能机制。方法:1.NAFLD体内外模型的建立与鉴定:20只SD雄性大鼠以基础饲料适应性饲养1周后,随机分为对照组(Control)和非酒精性脂肪肝组(NAFLD),分别予以基础饲料及高脂饲料喂养。LO2细胞分为control组和NAFLD组,分别用基础培养基和含0.2mmol/L软脂酸培养基培养。HE染色观察肝组织的形态学改变;油红O染色分别观察肝组织和LO2细胞脂肪蓄积情况;胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)试剂盒分别检测肝组织和LO2细胞内TC、TG含量。2.免疫组织化学观测肝组织GRP78蛋白的表达水平;PCR和Western-blot分别检测NAFLD细胞模型中ERS相关信号分子ATF6、GRP78、IRE1、SCAP、SREBP-1c和SREBP-2的mRNA及蛋白表达水平。3.雷公藤红素干预实验:将L02细胞分为control组、NAFLD组、雷公藤红素低剂量组(Cel 0.5)、雷公藤红素高剂量组(Cel 1)和辛伐他汀组(SIMVA)。油红O染色观察雷公藤红素干预后LO2细胞内脂质沉积情况;TC和TG试剂盒分别检测LO2细胞内TC、TG含量;PCR和Western-blot分别检测雷公藤红素作用下LO2细胞中ERS相关信号分子ATF6、GRP78、IRE1、SCAP、SREBP-1c和SREBP-2的mRNA以及蛋白表达水平。结果:1.NAFLD体内外模型的建立与鉴定:he染色显示control组大鼠肝小叶结构正常;而nafld组大鼠肝细胞排列紊乱,出现大量脂滴空泡。肝组织和lo2细胞油红o染色均显示control组红染颗粒少,肝细胞结构正常,且排列整齐;而nafld组肝细胞内含有大量红染颗粒且发生脂肪变性。control组肝组织和lo2细胞内的tc和tg含量均低于nafld组(p<0.05)。2.免疫组化结果显示nafld组大鼠肝组织grp78蛋白表达水平高于control组(p<0.05);pcr和western-blot结果显示nafld组lo2细胞内upr相关信号分子atf6,grp78和ire1的mrna和蛋白表达水平均高于control组(p<0.05);nafld组lo2细胞内固醇调节级联反应相关信号分子scap,srebp-1c和srebp-2的mrna和蛋白表达水平均高于control组(p<0.05)。3.雷公藤红素干预实验:油红o染色显示nafld组lo2细胞内含有大量红染颗粒,而cel0.5μg/ml组、cel1μg/ml组及simva组红染颗粒较nafld组有不同程度减少。nafld组lo2细胞tc及tg含量均高于control组(p<0.05),cel0.5μg/ml组、cel1μg/ml组及simva组lo2细胞tc及tg含量均较nafld组有不同程度减少(p<0.05)。pcr和western-blot结果显示:(1)nafld组lo2细胞内upr相关信号分子atf6,grp78和ire1的mrna和蛋白表达水平均高于control组(p<0.05);cel1μg/ml组和simva组lo2细胞内atf6,grp78和ire1的mrna和蛋白表达水平均低于nafld组(p<0.05)。(2)nafld组lo2细胞内固醇调节级联反应相关信号分子scap,srebp-1c和srebp-2的mrna和蛋白表达水平均高于control组(p<0.05);cel0.5μg/ml、cel1μg/ml组和simva组lo2细胞内scap,srebp-1c和SREBP-2的mRNA和蛋白表达水平均低于NAFLD组(P<0.05);Cel 1μg/ml组和SIMVA组LO2细胞内SREBP-1c和SREBP-2的mRNA和蛋白表达水平均低于Cel 0.5μg/ml组(P<0.05)。结论:1.ERS密切参与了NAFLD的脂变过程,在其发生发展起着重要作用。2.ERS中的UPR和固醇调节级联反应,及相关的IRE1/XBP-1通路和ATF6通路参与了NAFLD的发生发展。3.雷公藤红素能减轻肝细胞脂代谢紊乱,改善NAFLD,其机制可能与缓解肝细胞的ERS有关。