萱藻岩藻聚糖硫酸酯的制备及其抗血栓活性的研究

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岩藻聚糖硫酸酯(Fucoidan)是一种含硫酸酯的水溶性杂聚糖,是褐藻中特有的一种化学组分,其化学组成和结构随海藻的种类、生长季节和提取方法的不同而不同。研宄发现岩藻聚糖硫酸酯在医学方面具有独特的功效,具有抗凝血、抗血栓、抗肿瘤、抗HIV、提高免疫力、降血脂等活性,是陆地植物所无法比拟的。岩藻聚糖硫酸酯的化学性质尤其是分子量、硫酸根含量和岩藻糖含量对其活性影响很大,因此成为当今天然海洋药物主攻的重点之一。目前关于从泡叶藻、墨角藻、昆布、微劳马尾藻、鼠尾藻等海藻中提取的岩藻聚糖硫酸酯的活性已经有很多研宄报道,但是对萱藻岩藻聚糖硫酸酯的研宄还是空白。我国每年心血管疾病死亡者占因病死亡总人数的40.7%。其比例远高于人类大敌癌症,居各类死因之首,而血栓形成为其主要因素。因此,开发天然、高效、毒副作用小的抗血栓药物成为当今医药领域研宄的重点,对萱藻岩藻聚糖硫酸酯的抗血栓活性研宄具有重要的现实意义。本文以我国山东砣矶岛海域生长的萱藻为原料,主要从四方面对其进行研宄,结果如下:1.对萱藻的基本营养成分进行了分析,发现萱藻是一种高蛋白(18.93%)、低脂肪(4.13%)并且富含矿物质(31.26%)和膳食纤维(43.3%)的天然资源,是人类良好的健康食源。未检出Cr、Cu、Pb三种重金属元素,说明食用安全性较高,且必需氨基酸和非必需氨基酸比例合理(必须氨基酸占总氨基酸45.91%),是优质的氨基酸来源,风味氨基酸丰富。萱藻中含有3种饱和脂肪酸(SFA)和3种多不饱和脂肪(PUFA)。其中,亚麻酸(C18:3?3)含量为4.91%,二十碳五烯酸(EPA,C20:5?6)含量达到10.99%。萱藻中多不饱和脂肪酸比例较高(34.02%),对心脑血管疾病的防治具有重要功效。2.采用冷水和热水提取法从萱藻中浸提分别得到SLFC和SLFH两种粗品,分子量很大,分布范围较广,由于热水浸提的作用,硫酸根有不同程度的脱掉,因此SLFC的硫酸根含量高于SLFH,经Q-Sephrose FF阴离子色谱柱分级纯化制备出不同级别的岩藻聚糖硫酸酯,同时测定其分子量、硫酸根含量和单糖组成等主要化学指标,确定了岩藻聚糖硫酸酯的适宜分级洗脱浓度,即用0.8mol/L氯化钠溶液洗脱SLFC得到的组分SLFC1,用0.4mol/L氯化钠溶液洗脱SLFH得到的组分SLFH1,经过洗脱后,SLFC1和SLFH1的分子量有显著降低,分布范围减小,纯度上升,SLFC1和SLFH1的硫酸根含量均高于粗品中的。已有大量文献报道,硫酸根和分子量是影响抗血栓活性的关键因素。3.本文选择SLFC、SLFC1、SLFH和SLFH1四个组分进行抗血栓活性的研宄,选用直流电刺激诱导大鼠颈动脉形成血栓模型,研宄结果为:直流电刺激造成大鼠颈动脉血栓,可使血浆中TXB2的含量非常显著地提高,并非常显著地降低6-keto-PGFla的含量。说明直流电刺激可有效激活血小板,促进血小板聚集,使内皮细胞增生,形成血栓。SLFC1在低、高剂量时均会非常显著地延长大鼠颈动脉血栓全阻塞时间,极显著降低TXB2的含量,显著提高6-keot-PGFla的含量,说明SLFC1可以抑制血小板聚集又可以促进内皮细胞分泌6-keto-PGFla,显示出良好的抗血栓活性。而SLFC、SLFH、SLFH1三种组分在高剂量时可显著延长大鼠颈动脉血栓全阻塞时间,在低剂量下作用效果不明显。高剂量的SLFC和SLFH会显著降低TXB2的含量,但对6-keto-PGFla的含量影响不大,说明其主要通过抑制血小板的活化来发挥抗栓作用。高剂量的SLFH1可极显著降低TXB2的含量,显著提高6-keot-PGFla的含量,说明对血小板和血管内皮细胞均有较强的作用。4.在抗凝血实验中,四种岩藻聚糖硫酸酯在不同剂量下的表现与在抗血栓活性中的表现基本一致,SLFC1在低、高剂量时均会非常显著地延长APTT、TT,对PT、FIB和ATIII的含量无显著影响,说明其主要作用于内源性凝血途径来抑制凝血反应。高剂量的SLFC和SLFH可显著延长APTT、TT,对PT、FIB和ATIII无显著影响,低剂量时对APTT、TT、PT、FIB和ATIII的含量均无显著影响;高剂量的SLFH1可显著延长APTT,显著提高FIB的含量,对TT、PT、ATIII无显著影响。综上所述,萱藻岩藻聚糖硫酸酯具有较好的抗血栓、抗凝血活性,具有重要的研宄意义,为我国开发新型的萱藻抗血栓药物提供理论基础和科学依据,对萱操的精探加工和闻值化利用有待进一"步研宄。
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