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目的:本实验研究旨在通过SD大鼠原代心肌细胞缺氧复氧的建立,探索wnt/β-catenin经典信号通路在该模型中的表达差异,及其与心肌细胞凋亡的关系,以期发现心肌梗死的可能机制,寻求在心肌缺血再灌注治疗过程中减少心肌损伤的可靠方法。方法:（1）原代心肌细胞培养及鉴定:取新生SD大鼠40只,分离得到新生SD大鼠心脏,于预冷PBS中洗尽血液,用无菌解剖剪将心脏筋膜、血管清理后,剪碎,0.25%胰蛋白酶3ml 4℃冰箱过夜（14小时）消化后,再用Ⅱ型胶原酶消化得到原代心肌细胞,于37℃、5%CO2孵箱内差速贴壁80分钟,分离成纤维细胞与心肌细胞,计数板计数后,培养皿内接种,按照接种密度约1×10^5/cm2接种于细胞培养皿中正常培养48小时。48小时后进行α-actin心肌细胞鉴定。（2）心肌细胞缺氧复氧模型建立:心肌细胞鉴定后,随机分组7组,分别为对照组（control组）、缺氧2、4、6、8、10、12小时复氧2小时组（HxR2）,乳酸脱氢酶试剂盒（比色法）检验每组LDH（乳酸脱氢酶）活力、总超氧化物歧化酶试剂盒（羟胺法）检测SOD（超氧化物歧化酶）活力,探究缺氧复氧模型建立方法,最终测得LDH活力及SOD活力,统计学分析,荧光显微镜下观察心肌细胞各处理组,综合分析后选取缺氧8小时,复氧2小时组为最佳实验模型进行后续实验。（3）Real-time PCR:原代心肌细胞分组建立细胞模型,缺氧8小时,复氧2小时,并加入wnt/β-catenin激动剂及抑制剂药物干预后,按照不同分组对心肌细胞总RNA进行提取、逆转录,并用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测对照组（control组）、缺氧复氧组（H/R组）、缺氧复氧+DKK-1组（H/R+D组）、缺氧复氧+agonist 1组（H/R+A组）的wnt3a、β-catenin、c-myc mRNA表达量,统计学分析处理实验数据。（4）Westetn blot检测wnt3a、β-catenin、c-myc mRNA蛋白表达量:原代心肌细胞实验分为对照组（control组）、缺氧复氧组（H/R组）、缺氧复氧+DKK-1组（H/R+D组）、缺氧复氧+agonist 1（H/R+A组）建立细胞模型及药物干预后,分组提取心肌细胞总蛋白,BCA法测定蛋白浓度,经过SDS-PAGE电泳,PVDF膜转膜,孵育一抗,4℃过夜,孵育二抗,ECL法成像并统计条带灰度值,进行计算,分析统计各组wnt3a、β-catenin、c-myc蛋白表达量。（5）流式细胞技术检测细胞凋亡率,取出分组处理后的贴壁心肌细胞样本,用预冷的PBS清洗心肌细胞样本3遍,0.25%胰蛋白酶消化3分钟,10%胎牛血清终止消化。收集悬浮心肌细胞经离心,binding buffer重悬细胞,重复2-3次,加入Annexin V-FITC、PI标记,流式细胞仪检测细胞凋亡率,进行统计分析。结果:（1）1-3天新生大鼠心脏经胰蛋白酶及Ⅱ型胶原酶分离后可获得原代心肌细胞。缺氧复氧工作站可有效建立缺氧复氧心肌细胞模型。（2）缺氧8小时复氧2小时对wnt3a、β-catenin、c-myc mRNA相对表达量的影响:单纯H/R组wnt3a mRNA表达量高于对照组（P<0.05）,低于H/R+A组（P<0.05）,高于H/R+D组（P<0.05）。单纯缺氧复氧组β-catenin mRNA表达量高于对照组（P<0.05）,低于H/R+A组（P<0.05）,高于H/R+D组（P<0.05）。单纯缺氧复氧组c-myc mRNA表达量高于对照组（P<0.05）,低于H/R+A组（P<0.05）,高于H/R+D组（P<0.05）。（3）缺氧8小时复氧2小时对wnt3a、β-catenin、c-myc蛋白相对表达量的影响:单纯H/R组wnt3a蛋白表达量高于对照组（P<0.05）,低于H/R+A组（P<0.05）,高于H/R+D组（P<0.05）。单纯H/R组β-catenin蛋白表达量高于对照组（P<0.05）,低于H/R+A组（P<0.05）,高于H/R+D组（P<0.05）。单纯H/R组c-myc蛋白表达量高于对照组（P<0.05）,低于H/R+A组（P<0.05）,高于H/R+D组（P<0.05）（4）流式细胞技术检测新生SD大鼠心肌细胞各实验组细胞凋亡率。单纯H/R组高于对照组早期细胞凋亡率（P<0.05）,低于H/R+A组（P<0.05）,高于H/R+D（P<0.05）;单纯H/R组高于对照组晚期细胞凋亡率（P<0.05）,低于H/R+A组（P<0.05）,高于H/R+D（P<0.05）。结论:（1）“二步酶”法可有效分离并获得大鼠原代心肌细胞。（2）wnt/β-catenin信号通路,参与SD大鼠原代心肌细胞缺氧复氧过程,且该通路在原代心肌细胞缺氧复氧中被激活。（3）wnt3a、β-catenin、c-myc在缺氧复氧过程中参与调控心肌细胞凋亡过程,wnt信号通路的激活在一定程度上促进心肌细胞凋亡过程。