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慢性乙型病毒性肝炎传染性强,脂肪肝发病机制复杂,慢性乙型病毒性肝炎合并脂肪肝发生的临床病例逐年增加,诊断结果相互干扰,成为慢性肝病治疗的难点。而慢性乙型病毒性肝炎并发脂肪肝的发生机制至今尚无定论,也无有效治疗药物的相关报道。关于合并症状发病机制的探讨很大程度上依赖体内外相关模型的研究,但目前缺乏稳定可靠的体内外模型,因此建立稳定的慢性乙型病毒性肝炎并发脂肪肝体内外模型,寻找安全有效的天然药物意义重大。本课题以脂肪乳、油酸/棕榈酸(OA/PA)混合液分阶段诱导乙肝病毒(HBV)基因转染的HepG2.2.15细胞、HepG2肝癌细胞、HL-7702正常人源肝细胞建立慢性乙肝并发脂肪肝的细胞模型,并与高脂饲喂小鼠建立的营养性脂肪肝模型进行相关性比较,初步探讨了慢性乙型病毒性肝炎并发脂肪肝体外作用机制,研究了两种天然药物对合并症状的干预作用。一、慢性乙肝并发脂肪肝体外模型的建立用三种不同的细胞HepG2.2.15、HepG2、HL-7702建立游离脂肪酸(FFA:脂肪乳和OA/PA混合液)分阶段诱导脂肪肝模型,脂肪乳设置1%、0.5%、0.25%三个诱导浓度,12h、24h两个诱导时间,OA/PA混合液设置5mM、2mM、1mM、0.5mM、0.25mM、0.125mM六个诱导浓度,12h、24h、48h、72h四个诱导时间,细胞活力、TG含量、油红O染色结果显示1%脂肪乳诱导12h+0.5mM OA/PA混合液诱导24h最佳,此时脂肪变性显著且细胞活力较高,提示模型建立成功。经诱导HepG2.2.15细胞脂肪变性后模型组HBV DNA含量显著低于正常组。二、慢性乙肝并发脂肪肝模型的药物干预用100μg/mL、50μg/mL、10μg/mL三种不同浓度的两种天然药物A1:1806A、A2:1806C作用于HepG2.2.15、HepG2、HL-7702三种细胞,分别探讨实验药物对HepG2.2.15细胞脂肪变性和HBV复制的影响,对HepG2细胞脂肪变性的抑制作用以及对正常组织来源HL-7702细胞的保护作用,结果显示,A1和A2均可下调HepG2.2.15细胞HBV DNA水平,抑制HepG2细胞脂肪变性,保护HL-7702细胞免受外源性FFA诱导损伤。三、与营养性脂肪肝模型的相关性研究小鼠设置正常(普通饲料)、模型、阳性、高A1、中A1、低A1、高A2、中A2、低A2九个不同组别。除正常组外,其余各组均高脂饲喂,其中阳性组灌胃药物为辛伐他汀(Simvastatin),浓度10mg/kg。A1、A2分别为两种天然药物A1:1806A、A2:1806C,高中低对应的浓度分别为50mg/kg、10mg/kg、2mg/kg。饲喂三周后取肝组织进行血清学检测,并观察透射电镜结果,结果显示,模型组肝细胞中含有大量脂滴,小鼠脂肪肝模型建立成功。A1、A2两种药物均可显著下调肝组织TC、TG、AST、ALT、MDA水平,上调SOD、GSH-PX水平。总之,本论文用脂肪乳和OA/PA混合液对转入HBV基因的HepG2.2.15细胞进行分阶段诱导,成功建立慢性乙肝并发脂肪肝体外培养模型,证明了细胞脂肪变性可缓解HBV病毒复制进程。同时,和HepG2、HL-7702两种细胞进行了对比分析,并初步探讨了与高脂饲喂小鼠建立的营养性脂肪肝模型的相关性,为慢性乙肝并发脂肪肝的研究提供了部分科学依据。