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目的了解高糖环境下二甲双胍对抑癌相关mi RNAs(mi R-34a,mi R-126,mi R-143,mi R-145,mi R-342-3p,mi R-342-5p)表达的影响,并探讨二甲双胍是否通过mi RNA342-3p影响结肠癌干细胞增殖、凋亡及CD133 m RNA表达。方法1. 应用直接免疫磁珠法从SW480细胞株中分选CD133阳性的结肠癌干细胞作为研究对象并用流式细胞术分析CD133阳性结肠癌干细胞含量,无血清培养基进行培养。2.设置对照组(普通培养基,葡萄糖浓度3.1g/L)、二甲双胍组(普通培养基,20mmol/L二甲双胍MET干预)、高糖组(高糖培养基,葡萄糖浓度5.0g/L)、高糖MET组(高糖培养基,20mmol/L MET干预),作用24h后,使用mi RNA加尾法实时荧光定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)检测各组抑癌相关mi RNAs(mi R-34a、mi R-126、mi R-143、mi R-145、mi R-342-3p、mi R-342-5p)的表达;选择表达差异显著的mi R-342-3p作为目标mi RNA,高糖环境下使用慢病毒LV16-has-mi R-342-3p inhibitor及LV16-NC进行慢病毒侵染抑制试验,mi RNA加尾法q RT-PCR验证目标mi R-342-3p抑制成功。3.CCK-8试验:设置NC组(高糖培养基,LV16-NC转染)、NC MET组(高糖培养基,LV16-NC转染+20mmol/LMET干预)、抑制组(高糖培养基,LV16-has-mi R-342-3p转染)、抑制后MET干预组(高糖培养基,LV16-has-mi R-342-3p转染+20mmol/LMET干预),慢病毒侵染48h,MET作用24h后,采用CCK-8方法检测各组结肠癌干细胞的OD值,计算细胞活性。4.凋亡实验:设置NC组、NC MET组、抑制组、抑制后MET干预组,使用流式分析仪检测各组mi RAN342-3p-inhibited结肠癌干细胞细胞凋亡率。5.设置NC组、NC MET组、抑制组、抑制后MET干预组,高糖环境下作用24h后,q RT-PCR法检测各组结肠癌干细胞CD133 m RNA表达量。结果1.流式分析仪显示经免疫磁珠分选的细胞群中CD133~+结肠癌干细胞含量为82.37%;在无血清培养基中培养后可见细胞呈干细胞特性生长:细胞呈悬浮生长,逐渐增大变圆并形成明显的干细胞球。2. 各组mi RNA表达量变化:(1)与对照组相比,MET组抑癌相关mi RNA(mi R-34a、mi R-126、mi R-143、mi R-145、mi R-342-3p、mi R-342-5p)表达均显著增加(均P<0.05);与对照组相比,高糖组mi R-126、mi R-143、mi R-342-3p表达降低(均P<0.05),mi R-34a、mi R-342-5p表达增加(均P<0.05),mi R-145表达变化无统计学差异;与高糖组相比,高糖MET组mi R-126、mi R-342-3p表达增加(均P<0.05),mi R-145、mi R-342-5p表达降低(均P<0.05),mi R-34a、mi R-143表达变化无统计学差异(P>0.05);(2)选择抑癌相关mi R-342-3p作为目标mi RNA,慢病毒侵染抑制试验后q RT-PCR结果显示抑制组mi R-342-3p表达量较NC组显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05),提示结肠癌干细胞mi R-342-3慢病毒侵染抑制成功。3. CCK-8实验结果显,与NC组相比,NC MET组结肠癌干细胞OD值降低,细胞活力明显下降(P<0.05),抑制组细胞OD值及细胞活力无明显变化;与抑制组相比,抑制后MET干预组结肠癌干细胞OD值降低,细胞活力明显下降(P<0.05)。4. 流式细胞术结果显示,与NC组相比,NC MET组结肠癌干细胞凋亡率明显升高(P<0.05),抑制组细胞凋亡率无明显变化;与抑制组相比,抑制后MET干预组结肠癌干细胞凋亡率升高(P<0.05)。5.各组CD133 m RNA表达量变化:与NC组相比,NC MET组结肠癌干细胞CD133m RNA表达量降低,差异具有统计学意义(P<0.05),抑制组CD133 m RNA表达量增加,差异具有统计学意义(P<0.05);与抑制组相比,抑制后MET干预组结肠癌干细胞CD133 m RNA表达量降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论1.二甲双胍能够上调结肠癌干细胞中抑癌相关mi R-34a,mi R-126,mi R-143,mi R-145,mi R-342-3p,mi R-342-5p的表达。2.高糖环境下,结肠癌干细胞中mi R-34a,mi R-342-5p的表达上调,mi R-126,mi R-143,mi R-342-3p的表达下调,mi R-145表达无明显改变。3.高糖环境下,二甲双胍能够上调结肠癌干细胞mi R-126,mi R-342-3p的表达,抑制mi R-145,mi R-342-5p的表达,但对mi R-34a,mi R-143的表达无明显影响。4.高糖环境下,二甲双胍对结肠癌干细胞的促凋亡、抑增殖作用可能不通过上调mi R-342-3p的表达来实现。5. 高糖环境下,二甲双胍通过上调mi R-342-3p的表达而降低结肠癌干细胞CD133m RNA表达。