通过“巯基-烯”点击反应制备了一种新型的以三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯（TRIM）有机整体为基质的固定化酶反应器（IMERs）。首先需要制备TRIM有机整体柱,制备的TRIM有机整体柱表面有残余双键的存在,该双键在室温下能与胰蛋白酶上游离的巯基（胰蛋白酶的二硫键通过还原生成游离的巯基）发生点击反应从而将胰蛋白酶键合在有机整体柱上,而无需另外引入活性官能团。酶活性通过动力学参数K_m和V_max表征,通过离线色谱法测定。通过酶解标准蛋白质牛血清白蛋白（BSA）并与溶液酶解方法对比来评估IMERs的性能。使用IMER酶解5 min,通过Q-Exactive LC-MS/MS分析,测得BSA的序列覆盖率为79.41%,与溶液消解12 h后的序列覆盖率（82.7%）相当。通过酶解实际样品鸡蛋蛋清和小鼠肝脏的蛋白粗提取物来评估IMERs在蛋白组学分析复杂样品中的适用性,鸡蛋蛋清蛋白粗体物中鉴定出28种蛋白质（104个肽）;小鼠肝脏蛋白粗提物中鉴定出843种蛋白质（3916个肽）。结果表明,IMERs在高通量蛋白质组学分析中具有很大的应用潜力。在本研究中,胰蛋白酶通过戊二醛偶联成功固定在氨基化的介孔分子筛SBA-15上。SBA-15作为胰蛋白酶的固定支持物,其自身对酶具有很强的吸附力,再加上通过戊二醛偶联固定的胰蛋白酶,不仅提高了酶的负载量,也提高了酶的活性和稳定性。使用SBA-15分子筛溶液酶解方法具有分子筛难以回收,会有部分损失以及产物难以分离等缺点,因此将分子筛固定便可解决上述问题。本文制备了一种新型的SBA-15-NH₂掺杂的有机-纳米整体柱固定化酶反应器。通过离线色谱法HPLC表征胰蛋白酶的动力学参数K_m和V_max。此方法制备的IMERs稳定性良好,IMERs连续重复使用30次以及于4℃冰箱储存3个月后,酶活性依旧稳定。约1 mg/m LBSA变性溶液以2μL/min的流速注入2 cm长IMER于37℃反应5 min评估IMERs的酶解性能,通过数据分析,BSA酶解后的独立肽段数为64,序列覆盖率为73.8%。将在线变性与在线酶解集成于一个芯片内,用于实际样品小鼠肝脏蛋白粗体物的在线变性和在线酶解,共识别出734个蛋白,3067个肽段。结果表明,IMERs在高通量蛋白质组学分析中具有很大的应用潜力。