研究目的:胰腺癌是消化系统肿瘤之一,其恶性程度极高、预后极差的根本原因是早期诊断难度大和转移快。本文旨在探究DNA甲基化结合蛋白3(Methyl-CpG-binding domain 3,MBD3)对胰腺癌细胞增殖等生物学功能的作用,初步阐明其调控胰腺癌细胞干性的潜在作用机制,为今后MBD3在胰腺癌临床诊断和预后中的应用提供可靠的理论依据。研究方法:首先通过荧光定量PCR实验和Western blot实验检测MBD3在三种胰腺癌细胞中的表达情况并验证Flag-MBD3和sh-MBD3质粒的干扰和过表达效果。接着使用克隆形成实验、干细胞成球实验和动物实验检测MBD3对胰腺癌细胞增殖和干性的影响。采用Western blot实验检测MBD3对胰腺癌细胞中干性相关指标和Hippo/YAP信号转导通路相关指标的变化。分析TCGA数据库中MBD3和YAP表达量的关系,采用免疫沉淀(IP)实验、免疫荧光试验和核浆分离试验分析MBD3对YAP的影响。研究结果:荧光定量PCR和Western blot实验结果表明MBD3在SW1990、PaTu8988和PANC1细胞中mRNA和蛋白表达水平逐渐升高。验证结果表明sh-MBD3和Flag-MBD3质粒有效。下调MBD3,PANC1和PaTu8988细胞的增殖能力、克隆形成能力、干细胞成球能力提高。在PaTu8988和SW1990细胞中上调MBD3,其增殖能力、干细胞成球能力、克隆形成能力减弱。干扰MBD3后,PANC1和PaTu8988细胞中干性相关指标NANOG、SOX2、OCT4蛋白表达水平增高。过表达MBD3后,PaTu8988和SW1990细胞中NANOG、SOX2、OCT4蛋白表达量减少。在胰腺癌细胞中干扰MBD3后,YAP、MOB1和LATS1蛋白表达量增多,p-YAP、p-MOB1、p-LATS、SAV1、MST1和MST2蛋白表达水平降低。上调MBD3后,PaTu8988和SW1990细胞中LATS1、YAP和MOB1蛋白表达量减少,p-YAP、p-LATS、p-MOB1、SAV1、MST1和MST2表达量增加。TCGA数据库中分析得到MBD3与YAP的表达水平呈负相关。在人源胚胎肾细胞293T细胞中,IP实验结果表明MBD3蛋白与YAP蛋白相结合。在胰腺癌细胞中,免疫荧光试验,荧光素酶报告实验和核浆分离试验结果显示,MBD3抑制胰腺癌细胞中YAP的核转位。干扰YAP后,胰腺癌细胞中MBD3的mRNA和蛋白水平增高,在胰腺癌细胞中过表达YAP,MBD3的mRNA和蛋白表达量降低。研究结论:在胰腺癌细胞中,MBD3具有抑制其增殖和干性能力的生物学作用。MBD3通过与YAP结合,激活Hippo信号通路,抑制YAP核转位,从而抑制胰腺癌细胞的增殖、致瘤性和干性。