论文部分内容阅读
目的:肿瘤是目前导致死亡的常见原因之一。肿瘤的发生发展是一个多步骤、多因素调节的复杂过程,并以细胞的异常增生和转移为主要特征。许多肿瘤细胞表面表达糖复合物(包括糖蛋白,糖脂及蛋白聚糖)。这些糖复合物与肿瘤细胞的增殖和转移等生物学行为密切相关。岩藻糖(fucose,Fuc)是一种脱氧己糖,在人体中各个组织中广泛存在。许多糖复合物糖链中含有岩藻糖残基。这些岩藻糖残基赋予糖复合物多种生物学作用,引起一系列生物学效应。近年的研究发现,某些表达于肿瘤细胞表面岩藻糖化的寡糖链,参与调节肿瘤细胞增殖和转移等过程,这些岩藻糖化的寡糖与肿瘤的发生密切相关。因此,这些寡糖结构也被称为肿瘤相关糖抗原(tumor-associated carbohydrate antigens, TAAs),包括Le~a,Le~b,Le~x,Le~Y,sLe~X,sLe~a等。这些寡糖抗原均属于岩藻糖化糖抗原,由岩藻糖基转移酶(Fucosyltransferases, FUTS)催化生成。岩藻糖基转移酶催化底物发生岩藻糖基化反应,生成相应的路易斯寡糖(Lewis oligosaccharides)。目前在人类基因组中发现了十三种岩藻糖基转移酶。岩藻糖基转移酶Ⅶ(FucosyltransferaseⅦ,FUT7)属于α-1,3/1,4岩藻糖基转移酶,催化底物生成sLe~X,也是合成sLe~X的关键酶。研究发现,FUT7在许多肿瘤中异常表达。本文通过上调A431肿瘤细胞中FUT7基因表达的实验研究,初步探讨FUT7在肿瘤细胞增殖中的作用,为研究岩藻糖化的路易斯寡糖合成的调控与肿瘤细胞增殖的关系提供理论依据。方法:实验采用上皮来源的人子宫内膜癌细胞系A431,将A431细胞分为三组,(1)未加任何药物处理的对照组;(2)转染空载体的载体组;(3)瞬时转染FUT7-cDNA的转染组,进行如下实验:(1)在基因和蛋白质水平分别检测各组FUT7基因的表达水平,分析其表达差异。(2)根据MTT比色法测定结果,绘制各组细胞生长曲线,分析各组A431细胞增殖的变化情况。(3)RT-PCR和Western blot的方法分别检测各组增殖细胞核抗原(PCNA)在基因和蛋白水平上表达的差异。结果:(1)瞬时转染FUT7-cDNA后,RT-PCR和Western Blot结果显示转染FUT7-cDNA的转染组较对照组及载体组,FUT7基因表达增加,而对照组与载体组FUT7基因表达无显著差异。(2)MTT细胞生长曲线显示,与对照组及载体组比较,转染组的细胞增殖能力明显增高(p<0.05)。(3)RT-PCR和Western Blot分析结果表明,转染组的PCNA基因表达明显增加,而对照组与载体组PCNA基因表达无显著差异。结论: (1)转染FUT7-cDNA后,FUT7基因表达水平在A431细胞中明显升高。(2)上调FUT7基因的表达促进A431细胞增殖。(3)上调FUT7基因表达,使A431细胞中PCNA的表达增加。