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目的：恶性肿瘤的一个重要标志是转移，转移是导致恶性肿瘤患者最终治疗失败的主要原因。乳腺癌是妇女最常见的恶性肿瘤，虽然采取了以手术为主的综合治疗措施，但远期生存率并没有获得明显提高，影响预后的主要因素是发生了远处器官的转移。临床发现，约25～30％腋淋巴结阴性患者于术后5年内出现远处转移而导致治疗失败。因此，对于远处转移的早期检测及治疗成为提高乳腺癌患者远期生存率的途径之一。骨髓是乳腺癌最易发生远处转移的部位，骨髓微转移(bone marrow microrrletastasis，BMM)是指在骨髓抽吸或活检标本中检出了肿瘤细胞，而患者无任何临床、影像学上远处或骨髓转移的证据，它常以单个细胞或微小细胞团形式存在。如果能在早期检测到微小转移灶，则对疾病的分期、治疗、判断并改善预后具有重要意义。
乳腺癌骨髓微转移检测方法很多，如免疫细胞化学技术、流式细胞技术、分子生物学技术等，这些方法取得了令人欣慰的结果，体现了潜在的应用价值，但都存在一定的局限性，如肿瘤细胞表面抗原表达不均一、假性基因的存在、约2～10％的抗膜抗体对健康人骨髓细胞有抗原反应等，都可能会导致假阳性结果，并且这些方法多不能从形态学上证实肿瘤细胞的存在。本研究利用包备有抗上皮细胞粘附因子的纳米级免疫磁珠(anti-epithelial cell adtaesion molectlle-immunomagnetic bead，anti-EpCnom bead AM-IMB)富集乳腺癌患者骨lmmunomagnetic bead,anti-EpAAM-IMB)富集乳腺癌患者骨髓中转移的肿瘤细胞，将富集后细胞通过扫描电镜(scanningelectron microscope，SEM)从形态学上证实肿瘤细胞的存在，同时用结合异硫氰酸荧光素的抗细胞角蛋白抗体(anti-cytokeratin-fluorescein isothiocyanate，anti-CK-FITC)标记富集后细胞，在激光共聚焦显微镜(laser scanningmicroscope，LSM)下检测CK<+>细胞，联用两种标记物(anti-EpCAM、anti-CK)的敏感性及SEM、LSM的特异性，避免了由于交叉反应所造成的假阳性，同时从形态学上证实了肿瘤细胞的存在，进一步探讨乳腺癌BMM与影响乳腺癌预后的临床因素、病理因素的关系，明确乳腺癌BMM与预后的关系，为临床制定合理的治疗方案、评价预后提供理论依据。
方法：本研究随机取自2006年3月至10月在我院所收治经病理证实乳腺癌患者45例，健康志愿者4例(49例均已在骨髓穿刺知情同意书上签字)。研究对象均为女性，年龄30～67岁，平均49.8岁。术前在局部浸润麻醉下，髂前上棘行骨髓穿刺，抽取骨髓10～15ml，淋巴细胞分离液离心分层，收集有核细胞，IMB富集阳性对照、阴性对照、乳腺癌患者骨髓中转移的肿瘤细胞，将富集后细胞分成两等份，一份在SEM下采集肿瘤细胞图像，另一份用anti-CK-FITC标记细胞，在LSM下检测CK<+>细胞。将MDA-231乳腺癌细胞株制作成电镜标本，SEM下采集标准肿瘤细胞图象。统计学方法：采用SPSS13.0软件，行×列表X<2>检验和Fisher确切概率法。判断标准：P<0.05有统计学意义。
结果：
1．特异性检测：4份阳性对照在SEM、LSM下同时检测到肿瘤细胞，4份阴性对照在SEM、LSM下均未检测到肿瘤细胞。
2.45例乳腺癌骨髓标本中，16例在SEM、LSM下同时检测到肿瘤细胞，BMM阳性检出率为35.6％。
3.45例乳腺癌BMM与原发肿瘤大小的关系：乳腺癌BMM阳性率随着原发肿瘤增大而增高，肿瘤直径≤2cm组、2～5cm组及>5cm组BMM阳性率分别为11.1％、30.8％、70.0％，有统计学差异(P=0.020)。
4．45例乳腺癌BMM与临床病理TNM分期的关系：乳腺癌BMM阳性率随着临床病理分期增加而增高，临床I期组BMM阳性率为20.0％、Ⅱ期组25.0％、Ⅲ期组87.5％，差异有显著意义(P=0.003)。
5．45例乳腺癌BMM与腋窝淋巴结转移状况的关系：虽然腋淋巴结转移组BMM阳性率48.0％高于无转移组(20.0％)，但无统计学差异(P=0.053)。进一步分层研究发现，随着腋淋巴结转移数目增加BMM阳性率增高，腋淋巴结转移数目≥4个组BMM阳性率为58.8％高于腋淋巴结转移数目1～3个组(25.0％)及无腋淋巴结转移组(20.0％)，P=0.038。
6.45例乳腺癌BMM与年龄、月经状况的关系：本研究未发现乳腺癌BMM与年龄、月经状况有关(P>0.05)。
7．45例乳腺癌BMM与组织学分级、病理类型的关系：45例乳腺癌BMM阳性率随着组织学分级增加而升高，组织学分化I级组BMM阳性率为9.1％低于Ⅱ级组(33.3％)及Ⅲ级组(61．5％)，有统计学差异(P=0.027)。本研究未发现乳腺癌BMM与病理类型有关(P>0.05)。
8.45例乳腺癌BMM与ER、PR、C-erbB．2、VEGF在肿瘤组织表达的关系：乳腺癌BMM阳性率随着ER、PR蛋白表达增强而降低，ER、PR阳性组BMM阳性率分别为18.2％、7.7％低于ER、PR阴性组(52.2％、46.9％)，差异有显著意义(P<0.05)。本研究未发现乳腺癌BMM与C-erbB-2、VEGF在肿瘤组织的表达有关(P>0.05)。
结论：1．IMB联合SEM、LSM检测原发性乳腺癌：BMM阳性检出率为35.6％。4份阳性对照在SEM、LSM下同时检测到肿瘤细胞，4份阴性对照在SEM、LSM下均未检测到肿瘤细胞，本实验检测肿瘤细胞特异性为100％。2．乳腺癌BMM与原发肿瘤大小及临床病理TNM分期有关，肿瘤的侵袭转移能力随着原发肿瘤增大而增强，临床分期越晚，出现骨髓转移几率越高。但肿块小、无淋巴结转移的I期乳腺癌患者，亦存在约20％的BMM，提示乳腺癌是一种全身性疾病，转移及播散很早即可发生，故临床上应常规进行BMM检测，可以更早、更准确地了解患者全身播散情况。3．虽然乳腺癌BMM与腋淋巴结转移与否无关，但进一步分层研究发现，随着腋淋巴结转移数目增加BMM阳性率增高，说明血行播散与淋巴结转移是乳腺癌转移的两条相对独立的途径，当腋窝淋巴结出现较多转移时，癌细胞可能通过淋巴导管再次入血从而增加了转移机会。因此，对临床分期早、肿块小、腋淋巴结阴性患者，应常规行BMM检测，发现具有早期复发、转移危险的高危人群，制定相应的“个体化”治疗原则。4．乳腺癌BMM阳性率随着组织学分级增加而升高，说明分化程度低的肿瘤细胞具有更强的增殖、侵袭、转移能力，对这部分病人应加强化疗等综合性治疗，密切关注全身转移情况。5．乳腺癌BMM阳性率随着ER、PR蛋白表达增强而降低，ER、PR蛋白表达为阳性时，BMM的几率降低，说明分化愈差的肿瘤细胞，ER、PR丢失愈多，可能具有更强的增殖、侵袭、转移能力，提示ER、PR阴性乳腺癌患者比ER、PR阳性患者血行转移的风险性可能更大。6．本研究未发现乳腺癌BMM与年龄、月经状况、病理类型及肿瘤组织中C-erbB-2、VEGF的表达有关。7．乳腺癌骨髓微转移的检测与部分传统临床指标及一些生物学因子在乳腺癌预后判断上存在一致性，且更能反映肿瘤细胞的全身播散状况，应将其作为一个窗口，通过动态检测，了解治疗效果，监测病情变化，调整治疗方案，判断转归，特别对分期早、肿块小、腋淋巴结阴性者，确定具有早期复发、转移危险的高危人群，在其发展为临床转移之前，给予全身治疗，以控制全身性转移灶的发生，从而渴望降低乳腺癌患者复发、转移率，提高生存率，延长生存期。