TSA对克隆囊胚率的提高及同期发情的处理方法对胚胎移植的影响

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实验以牛胎儿成纤维细胞作为供体核,以牛卵母细胞作为受体胞质进行体细胞核移植,用80nmol/L曲古抑菌素A(Trichostatin A, TSA)处理牛胎儿成纤维细胞12 h,以TSA处理后的牛胎儿成纤维细胞为供体细胞进行胚胎重构,重构完成后继续处理克隆胚胎0、6、12和24 h。应用激光共聚焦显微镜检测供体细胞组蛋白H4K12乙酰化水平,并通过核移植检测不同时间处理的克隆胚胎发育率。同时对不同同期发情方法对胚胎移植效果进行了比较,以寻找适合当地条件的同期发情方案。分别采用一次注射前列腺素(PG)、二次注射前列腺素(PG)、阴道埋植栓(CIDR)+前列腺素(PG)三种方法进行同期发情处理,并设自然发情组作胚胎移植效果比较。1、TSA处理12 h的供体细胞组蛋白H4K12乙酰化水平显著增高;2、80 nmol/LTSA处理12 h的克隆胚的囊胚发育率显著高于未处理组(21.9%vs 16.5%,p<0.05);3、TSA处理24h的重构胚的各期发育率均很低,与对照组差异显著;TSA处理6 h的重构胚的囊胚发育率与对照组无显著差异;TSA处理细胞对细胞融合率没有影响。4、二次注射PG、CIDR+PG3、一次注射PG三种同期发情处理后的发情率分别为:74.70%、77.64%、71.19%,受体移植后的妊娠率鲜胚分达到52.12%、53.26%、50.44%,冻胚受胎率分别达到46.87%、41.44%、44.00%,这三组间差异不显著(P>0.05)。5、自然发情利用率达到85.71%,显著高于二次PG法注射同期处理组,选取自然发情牛作为受体显著提高胚胎移植成功率。
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