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第一部分PCB118慢性暴露对子宫内膜容受性及胚胎着床的影响目的：多氯联苯(PCBs)被视为一种典型的持久性有机污染物。研究表明,多氯联苯暴露可导致大量的异常内分泌行为,但有关PCB118暴露对不良妊娠结局的影响特别是对胚胎着床这一特殊时期的影响还鲜见报道。方法：将48只CD-1小鼠随机分为4组：空白对照组,1μg/kg PCB118剂量组,10μg/kg PCB118剂量组,100μg/kg PCB118剂量组。给予灌胃一个月后,合笼,于妊娠第5天断椎处死小鼠,留取子宫内膜组织。记录体重增长率,子宫脏器系数,用台盼蓝染色观察着床位点数量,采用HE染色观察子宫内膜结构形态,扫描电镜观察子宫内膜组织上皮细胞上胞饮突的生长。采用Real-time PCR检测子宫内膜组织着床相关基因如ESR1、PGR、HOXA10及ITGB3的mRNA表达,免疫组化和westernblot检测上述基因的蛋白水平表达。结果：相对于正常对照组,在1μg/kg和100μg/kg PCB118慢性暴露组胚胎着床点数量明显减少(P<0.05),相应的,子宫内膜组织大体形态结构发生改变包括开放性腔上皮增多,基质细胞紧密等；扫描电镜下显示子宫内膜组织上皮细胞上胞饮突生长少,形态不一,内膜发育不良。Real-time PCR结果显示子宫内膜容受性相关基因ESR1、HOXA10、ITGB3的mRNA表达显著降低；Westernblot及免疫组化结果显示ESR1、HOXA10、ITGB3的蛋白表达水平和mRNA表达水平趋势一致。PGR无论是mRNA水平还是蛋白水平均未见明显改变。结论：PCB118慢性暴露可能通过干扰ESR1、PGR的表达平衡,抑制HOXA10、ITGB3的表达,从而影响子宫内膜组织结构形态的形成,特别是干扰胞饮突的生长发育,进而影响胚胎着床第二部分PCB118对着床期ESR1及HOXA10基因的甲基化模式调控目的：表观遗传学如DNA甲基化是近来研究的热点,PCBs可通过调控甲基化模式影响个体生物学行为如肿瘤发生等。本研究目的是从调节机制上探讨甲基化是否参与到PCB118干扰子宫内膜容受性相关基因表达的调控中。方法：将48只CD-1小鼠随机分为4组：空白对照组,1μg/kg PCB118剂量组,10μg/kg PCB118剂量组,100μg/kg PCB118剂量组。给予灌胃一个月后,合笼,于妊娠第5天断椎处死小鼠,留取子宫内膜组织。提取子宫内膜DNA,采用重硫酸盐测序,甲基化特异性PCR检测子宫内膜容受性相关基因ESRl、HOXA10启动子区甲基化水平,通过Real-time PCR和Westernblot检测DNMTs、 EZH2、MLL1、H3K4、H3K27的表达结果：PCB118慢性暴露明显上调了HOXA10基因启动子甲基化水平,DNMTs表达水平也明显升高。组蛋白H3K27及其甲基化转移酶EZH2表达未见明显改变,而组蛋白H3K4及其甲基化转移酶MLL1表达明显上调。结论：PCB118可能通过上调HOXA10基因的DNA甲基化水平,干扰子宫内膜容受性相关基因的表达,进而影响胚胎着床,而ESR1基因甲基化调控不是PCB118慢性暴露影响基因表达的主要方式。另外PCB118慢性暴露干扰着床期组蛋白甲基化修饰,MLL1及其调控表达的H3K4可能是关键作用分子。第三部分甲基化芯片筛选PCB118暴露后子宫内膜容受性受损的新靶点目的：子宫内膜容受性是一个涉及众多基因和分子调节的过程。HOXA10是影响子宫内膜容受性的关键分子,但并不是唯一决定因素。本研究目的在于分析PCB118慢性暴露后着床期小鼠子宫内膜组织中全基因组启动子甲基化行为模式,并从中筛选出特定的代表性分子,为临床着床失败的病因分析、早期诊断、和分子靶向药物的开发提供依据。方法：构建PCB11慢性暴露的小鼠模型,于妊娠第5天断椎处死小鼠,留取子宫内膜组织。提取DNA,采用高密度甲基化芯片分析全基因组DNA甲基化改变。利用GO分析进行生物学信息分析,并从中筛选出4个代表基因,利用MeDIP-qPCR (甲基化DNA免疫共沉淀一实时定量PCR)检测特定基因启动子区甲基化水平;采用实时定量PCR检测特定基因mRNA表达水平。结果：高密度甲基化芯片显示,PCB118慢性暴露组引起了2591个基因启动子发生差异甲基化改变,其中385个基因启动子发生了明显差异甲基化改变。这些发生差异甲基化改变的基因启动子大部分属于高CpG含量的启动子。进行GO分析发现,PCB118慢性暴露影响了众多分子生物学过程如分子代谢,细胞周期等。从信号通路角度分析,PCB118主要影响与肿瘤信号相关的信号通路分子和MAPK信号通路分子。根据GO分析我们筛选出4个基因(PCDH17、ITGB8、FREM2及FGF4)进行MeDIP-qPCR,显示,相对于正常对照组,PCB118慢性暴露组中PCDH17、ITGB8、FREM2及FGF4这4个基因启动子呈现高甲基化水平,与DNA甲基化芯片结果一致,有明显统计学差异(P<0.05)。Real-time PCR显示,PCDH17、ITGB8、FREM2及FGF4这4个基因在剂量组的mRNA表达水平明显降低,和DNA甲基化水平呈现负相关。结论：PCB118慢性暴露可引起着床期子宫内膜组织众多基因启动子甲基化水平改变。肿瘤信号通路及MAPK信号通路是未来针对PCB 118生殖毒性研究的方向。其诱导着床期特定基因(PCDH17、ITGB8、FREM2及FGF4)启动子发生高甲基化,并且引起这些基因表达沉默,可能是PCB118发挥生殖毒性的分子机制之一,该4个基因可能成为临床研究靶向药物的依据。