论文部分内容阅读
制备并表征具有肝癌靶向特性的海藻酸-阿霉素大分子前药纳米囊泡递药体系（ALG-DOX-V）,并对其抗肿瘤效果进行研究评价,具体工作内容如下:ALG-DOX的化学制备和物理化学性质相关表征:采用氨基和羧基的酰胺缩合反应合成ALG-DOX大分子前药,由于阿霉素分子结构中含有氨基（-NH2）,海藻酸分子结构中含有大量羧基（-COOH）,利用EDC/NHS活化海藻酸结构单元中化学活性较高的古洛糖醛酸上的-COOH,得到ALG-DOX大分子前药,经去离子水透析,该大分子前药在溶液中由于亲疏水性而产生自组装,得到最终产物ALG-DOX-V纳米囊泡,用于肝癌靶向治疗。透射电镜结果显示ALG-DOX-V呈中空的球形囊泡结构。马尔文Zeta-Sizer纳米粒度仪检测ALG-DOX-V的平均水合粒径为169.2±3.19 nm、粒径呈正态单峰分布,Zeta电位为-31.7±1.6 mV,且该纳米体系在溶液中具有良好的粒径稳定性。采用紫外分光光度法测得其载药量为19.8±1.92%,包封率为67.3±2.83%。采用动态透析法,模拟在三种不同的人体生理条件pH值下ALG-DOX-V的累积释药率,结果表明ALG-DOX-V的释药过程呈现明显的缓释性。ALG-DOX-V的体外生物相容性评价:采用兔血检测ALG-DOX-V和DOX的溶血率;采用MTT比色法研究DOX和ALG-DOX-V对人脐静脉内皮细胞、大鼠心肌细胞、人肝正常细胞存活率的影响。结果表明与游离DOX相比,ALG-DOX-V具有更良好血液和细胞相容性。ALG-DOX-V的体外抗肿瘤作用评价:选取BEL-7402、SMMC-7721、HepG2三种人肝癌细胞系,采用MTT比色法检测细胞存活率。结果表明,随着药物处理时间延长以及药物浓度增加,三种肝癌细胞的ALG-DOX-V组细胞存活率均明显降低,呈现剂量依赖性与时间依赖性。通过荧光拍照分析BEL-7402细胞,SMMC-7721细胞以及HepG2细胞对于ALG-DOX-V的摄取情况。结果证明,随着药物孵育细胞时间的延长,细胞对于ALG-DOX-V摄取量也逐渐增多,与细胞毒性实验结果相匹配。采用流式细胞术比较BEL-7402细胞对与DOX和ALG-DOX-V的摄取情况,结果显示,ALG-DOX-V具有一定缓释性能。通过荧光拍照运用竞争结合实验测定BEL-7402细胞对DOX和ALG-DOX-V的摄取情况,结果表明ALG-DOX-V具有甘露糖受体靶向性。ALG-DOX-V的体内抗肿瘤效果研究:选用肝癌细胞BEL-7402建立裸鼠移植瘤模型,进行7次隔天注射给药,连续记录裸鼠的肿瘤体积和体重,以及解剖后肿瘤重量,将各组肿瘤组织与心、肝、肾组织进行H&E染色,评价ALG-DOX-V对肿瘤增殖的抑制效果以及对正常组织的毒性。结果显示,相较于DOX,ALG-DOX-V对肿瘤增殖有较强抑制作用且有效降低DOX对正常组织的毒副作用。