本文首先利用CRISPR/Cas9技术在结肠癌细胞HCT116中成功敲除了CELF6基因,通过转录组测序和基因富集分析发现在CELF6基因敲除细胞中p53信号通路显著富集,预示着CELF6可能参与调控p53相关信号通路和肿瘤的发生发展。我们通过荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹实验检测了p53、p27、p21、Wee1、cyclin B1、Gadd45α等和p53信号通路及细胞周期相关重要调控基因的表达,发现敲除/敲低或过表达CELF6对p21的表达影响最为明显。我们初步探讨了CELF6调控p21表达的分子机制,用放线菌素D(Act D)抑制细胞内新RNA的合成,发现在过表达CELF6的细胞中p21蛋白积累比较明显;荧光定量PCR结果表明过表达CELF6细胞内的p21 m RNA的降解速度相比较于对照组而言显著变慢,说明CELF6可能影响p21 m RNA的稳定性,但是在p53敲低/敲除的细胞中过表达CELF6并不影响p21的表达,说明CELF6对p21的调控可能是p53依赖性的;通过RIP-q PCR实验我们初步证明CELF6可以和p21 m RNA结合;为了明确CELF6是结合到p21 m RNA上3’UTR还是5’UTR区域,我们构建了p21(5’UTR+ORF)、p21(full length)、p21(ORF+3’UTR)三种过表达质粒分别与His-CELF6共同转染HCT116细胞,发现与p21(5’UTR+ORF)共转的那一组p21蛋白的表达量显著下降,说明CELF6有可能通过结合p21 m RNA上3’UTR区域调控其稳定性。此外,我们还探究了CELF6对细胞增殖和细胞周期的影响,流式细胞实验显示敲除或敲低CELF6后G1期细胞比例显著降低,而S期细胞和G2/M期细胞所占比例明显升高,并且细胞增殖明显比对照组细胞快,而过表达CELF6则造成G1期细胞的积累。Ed U免疫荧光实验也证实敲除CELF6的细胞中S期比例要明显高于对照组细胞。细胞增殖和克隆形成实验显示敲除/敲低CELF6细胞的增殖速度显著高于对照组细胞。综上所述,我们的研究结果证明CELF6通过和p21 m RNA上3’UTR区域结合来影响p21 m RNA的稳定性,CELF6调控p21表达可能是p53依赖性的。CELF6通过转录后调控p21的蛋白表达进而调节肿瘤细胞增殖和细胞周期进程。