微藻目前已成为生物能源的最具潜力的新原料。由于微藻的遗传转化技术的匮乏,关于微藻的基因工程研究和成果进展相对植物微生物而言比较缓慢。三角褐指藻是硅藻研究的模式藻之一,而且脂质含量高、生长速度快。为了快速培养能以最大的效率累积脂质,需要对三角褐指藻做更深入的基因操作工作。丙酮酸脱氢酶复合体(pyruvatedehydrogenase complex,PDC)催化丙酮酸氧化脱羧生成乙酰辅酶A。丙酮酸脱氢酶激酶(pyruvate dehydrogenase kinase,PDK)能催化PDC磷酸化使之失活。因PDC催化生成的乙酰辅酶A是脂肪酸合成的重要原料。因此设法降低PDC的磷酸化则可以提高其活性,进而增加脂肪酸合成。本研究运用反义RNA技术,从三角褐指藻中克隆PDK基因(Pt PDK1)的1261-bp的全长c DNA片段。构建含有反义Pt PDK1基因的重组载体,该载体含有fcp C基因的启动子和终止子驱动的Pt PDK1反义表达盒,以及用于遗传转化选择标记的硝酸还原酶启动子和终止子驱动的CAT(氯霉素乙酰转移酶)基因表达盒。通过电击法转化三角褐指藻,含有抗CAT表达盒的转基因三角褐指藻能够诱导藻细胞产生抗氯霉素的特性,因此在含有氯霉素的选择性培养基中筛选得到转基因藻株。转化藻通过基因组DNA的PCR分析表明外源基因已经插入藻基因组,通过实时定量q PCR分析表明Pt PDK1基因的m RNA表达水平被显著抑制。显微结构观察表明胞内贮油细胞器油体的体积增大数量增加。脂质含量测定分析表明转化藻的脂质含量增加了30%,本研究成功获得了脂质含量显著提高的反义基因抑制的转化藻,为微藻生物柴油研发提供了理论依据和实验支撑。